Ailamiento de actinomyces

Aislamiento de actinomyces:

Se hace uso del medio Agar Avena de acuerdo a recomendaciones de Franco-Correa [2] junto con el método de diluciones seriadas; la composición de este medio para un litro es: 30 g de Avena en hojuelas, 15 g de agar-agar y 0,1% de nistatina; para el aislamiento se toman 10 g de suelo en 90 ml de Agua peptonada (AP) 0,1%, a partir de esta dilución inicial se preparan diluciones sucesivas tomando cada vez un mililitro de solución y adicionando 10 ml de AP hasta alcanzar una dilución de 10-9. Posteriormente se siembra 0,1 ml de cada dilución por superficie, en el Agar Avena servido en cajas petri, realizando triplicado de siembra para cada dilución. Finalmente se lleva a incubar a 28°C durante 10 días. A partir del día 3 de incubación se hace el recuento de toda la población microbiana que empieza a crecer en cada una de las diluciones efectuadas, así, hasta el día 10, para luego reportar las unidades formadoras de colonia (UFC) por gramo de suelo de cada sub-ecosistema. El recuento permite identificar por morfología macroscópica posibles colonias de Actinomicetos, las cuales una vez identificadas son aisladas para su purificación por medio de repliques en Agar Avena [2]

Identificación de actinomyces:

Se lleva a cabo una identificación macro y microscópica de las colonias obtenidas en el medio agar avena; macroscópicamente se observan las características de crecimiento considerando textura, color, forma, superficie y borde; microscópicamente se hace reconocimiento por medio de la tinción de Gram y haciendo uso de la técnica de Microcultivo de Ridell, para observar el crecimiento de micelios aéreos de los posibles actinomicetos [8]

La técnica de Microcultivo (figura 2) requiere realizar una siembra por agotamiento del posible Actinomiceto en medio agar avena, una vez se observa el crecimiento de la colonia característica macroscópicamente, se procede a realizar una cuadricula en el medio con un bisturí estéril obteniendo unidades de 1 cm de lado por 3 mm de espesor y se llevan a un frasco con 50 ml de agua destilada estéril, realizando agitación constante. Se toma una caja de Petri con medio sin inocular y se siembre 1 ml de la solución que ha sido previamente agitada y se homogenizada muy bien esta siembra; posteriormente se toma un cuadro medio recién inoculado y se coloca sobre un cubre objetos soportado en dos palillos ubicados en caja Petri (previamente estéril); este montaje requiere hidratación suficiente por lo que se ubica  una mota de algodón humedecida, en un extremo de la caja; se lleva a incubación a 28°C durante 10 días [8]

Se realizan observaciones a los días 3, 6 y 9, tiñendo con azul de lactofenol el agar y el cubreobjetos y se hace tinción de Gram al portaobjeto; además se comparan las estructuras miceliares de los días mencionados anteriormente con la clave taxonómica de Bergey [9]. (Identificación de género parcial).

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http://repositorio.utp.edu.co/dspace/bitstream/handle/11059/3050/58073S161.pdf?sequence=1

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