Microbiologia postulados

 19/09/2017    MICROBIOLOGÍA

→1886 Haeckel: división de los seres vivos en 3 reinos: animales, plantas y los demás (protistas: microorganismos bacterianos, animales, plantas y microscopios).

→S XIX: Naturalistas. Estudios de ontogenia: evolución de embriones en diferentes especies.

→1930 Copeland: divide el reino protista en: moneras (protistas procariotas) y protoctistas (protistas eucariotas).

→1968 Murray: división en procariotas (moneras) y eucariotas (protoctistas).

→1969: Whittaker: división en 5 reinos. Para poder establecer la evolución de todos los seres vivos hay que recurrir a criterios obejetivos: compareción de moléculas; moléculas lineales formadas por subunidades variables, que estén presentes en todos los seres vivos. Estas son las proteínas y los ácidos nucleicos. Los ribosomas están presente en todos los seres vivos, todos los organismos tienen genes que codifican para los genes ribosomales (ARN + prot).

→ROBERT KOCH  (1843-1910)

4 postulados.

A nivel de patología infecciosa quien puso las bases para demostrar un determinado microorganismo de un proceso infeccioso era este médico. Fue el que propuso los 4 postulados de obligado cumplimiento para que un microorg puedas ser considerado responsable de un proceso infeccioso o indrustrial.

Se basan en experimentación conanimales. Observaba ratones que presentaban perdida de mov, de apetito, fiebre etc. Estos animales no presentaban actividad. En estos animales cuando hacia extracciones de sangre, observaba células de sangre y además observaba lo que ponía como el patógeno sospechoso. Cuando la hacia en un indv sano, no encontraba este patógeno.

Las cuatro condiciones son:

1. El microorg debe estar presente en todos los casos en los que el raton este infectado. En un proceso indrustrial, en todos los casos en que la fermentación arranque debe haber un incremento en la cantidad de levaduras.
2. El microorg debe de poder ser aislado del hospedador o del proceso y obtenerse el cultivo puro. Un cultivo puro es aquel conjunto o población de micrroorg procedente de un único indv.        EJ: Estamos cogiendo una extracción de sangre y los niveles poblacionales son de 10^9 cel/ ml de sangre. ¿Como estamos seguros de que el cultivo es puro? (de que proviene de un único indv) // Hay 4 poblaciones en el mosto y en la sangre hay dos. Una es el malo y la otra el bueno.  NO HABRIA QUE HACER DILUCIONES. Si hacemos una dilución de 0,1/10 es lo mismo que 1/100→ 10^7→10^5→10^3→10^1 (Pero podríamos tener 10 bacterias o 9). ¿Como determinamos que tenemos una única bacteria? A no ser que las 10 bacterias que tenemos las cojamos y les suministramos los nutrientes necesarios para que crezcan en una SUPERFICIE SÓLIDA (quedan donde las depositamos, y al tener nutrientes se multiplican, normalmente por bipartición, esto se llama una progresión exponencial, y esta población llega un momento que es tan grande que se vuelve visible) .Los indv que son capaces de reproducirse generan una colonia, y las cel/ml  pasan a ser ufc (unidades formadores de colonias: población de microorganismos capaces de generar una colonia (CULTIVO PURO)). Pero no había cultivos en el S XIX. Cock estaba tomando patatas, la abrió por la mitad y depositó sobre la superficie una superficie de organismo, y las bacterias eran capaces de metabolizar almidón y utilizarlo como fuente de carbono. No todos los microorganismos utilizan la misma fuente de carbono (glucosa universal como fuente de C, y como fuente de N extractos de carne y agua). Para que un organismo quede inmovilizado el sustrato sobre el cual se deposite debe ser SÓLIDO, necesitamos un agente solidificante que tenga las siguientes características: ha de ser esterilizable mediante calor húmedo, ha de conservarse sólido a la temperatura de incubación (temperatura óptima a la cual crece el microorg, 37 grados) líquido a altas temperaturas, y cuarta condición, que no sea metabolizable por los microorganismos (que no lo pueda utilizar como alimento). El primero fue la GELATINA, aunque a los 37 grados comienza a licuar, por lo tanto no se podía utilizar para bacterias patógenas humanas, además, al ser una pp, es facilmente atacable por enzimas. El AGAR AGAR (polisacárido que se extrae de algas marinas) presenta todas las condiciones presentadas anteriormente. Se ponen entre 15 y 20g, depende de lo solido que lo queramos `→`receta´´:2g de glucosa + 20g de agar agar + extractos de carne + agua destilada. Es turbio porque el agar agar no se ha disuelto. Se disuelve cuando todo el liquido alcanza una temperatura de 100 grados. Cuando se ha disuelto, el medio de cultivo queda transparente, y no se puedo utilizar porque todavía está contaminado con microorganismos. Hay que someter el medio de cultivo a esterilización. Cuando sacamos este medio de cultivo estéril, sale líquido ( hasta 50 grados) a partir de ahí empieza a solidificar, y una vez ha solidificado, volvería a licuar a partir de 100 grados) Cumple todas las premisas de un agente solidificante.   → En el caso de los ratones había dos candidatos a ser el agente patógeno. ¿Podemos obtener cultivos puros sin realizar diluciones?  Tenemos un asa de cultivo y dos placas Petri. Esterilazamos el Kolle, y una vez lo enfriamos tocamos el ml de sangre del raton, entonces ese asa está cargada. En ese momento tiene la concentración de microorg que hay en el tubo (10^9 cel/ml). Si la cogemos y la empezamos a desplazar en un medio de cultivo idóneo, la concentración es cada vez menor en la superficie, y la cantidad de bacterias que vamos depositando por unidad de superficie es cada vez menor. Entonces cogemos el asa y la esterelizamos mediante calor. Sin volverla a cargar, tocando la supercicie hacemos una serie de líneas. Si la concentración en la primera depositación era alta, aquí también lo es debido a que hemos hecho una redistribución de los microorg  de la anterior superficie. Repetimos el mismo proceso y la concentración va bajando cada vez mas, en la la cuarta depositación la concentración es tan baja que las bacterias están suficientemente separadas, tenemos colonias con morfologías diferentes que se corresponden con los diferentes candidatos. Transferimos cada una de ellas a un tubo, obteniendo ambos cultivos puros. A este sistema se le denomina siembra escocesa. Si hacemos un triángulo invertido, sin esterilizarla la giramos 90 grados y hacemos otro triangulo invertido, asi sucesivamente y sin tocar el triangulo precedente, a esto le llamamos siembra por agotamiento del asa.
3. A partir de cada uno de estos tubos, inoculamos los cultivos puros en individuos que hasta este momento han estado sanos. El agente infeccioso será el inoculado al ratón que presente la sintomatología de la infección. Industrialmente, el fermentador que no ha arrancado la fermentación, al inocularle el cultivo puro, la arrancará.  
4. El microorganismo debe ser recuperable de nuevo a partir del hospedado o proceso inoculado experimentalmente.

-Cuando más pronto nos aparezcan colonias separadas, menor será la concentración de microorganismos.

¿Cuándo dejó de funcionar este proceso? Con los vegetales, debido al mosaico del tabaco (necrosis en las hojas del tabaco). Demostración de que es debida a una bacteria:

1. Machacamos las hojas de tabaco y al observar al microscopio, además de observar material vegetal, deberíamos observar los agentes infecciosos, pero no se observaba nada. ¿Cómo liberamos un producto de microorganismos? Aplicando un filtro esterilizante (con un diámetro de poro suficientemente pequeño), obtenemos un líquido, que en principio está estéril, y lo aplicamos sobre una hoja de tabaco sana.
2. Si hemos eliminado todas las partículas infectivas, no debería reporducirse la enfermedad, pero se volvía a reproducir. El agente infeccioso se le denominó veneno (virus). El agente infeccioso no era perceptible a los instrumentos de observación, por lo tanto hasta al descubrimiento del microscopio electrónico, se ponían en evidencia los postulados de Cock.

Los ADN no son estables, y el bacteriano se estabiliza mediante interacción con proteínas básicas como las poliaminas, y con las histonas el eucariota.

 LA CÉL. PROCARIOTA NO TIENE NI MITOCONDRIAS NI CLOROPLASTOS.

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