Práctica 1: Cromatografía en Papel

Práctica 1: Cromatografía en Papel

Objetivo: Aprenderás a realizar la cromatografía en papel e identificarás los diferentes componentes de la cromatografía.

Reactivos:

Un pliego de papel cromatográfico o filtro de grano fino (uno por cada equipo)

Lápiz HB con punta fina (traer sacapuntas, no usar portaminas) y regla de acero de 30 cm (una por equipo). Tijeras.

Tintas/colorantes o bolígrafos de colores: azul, verde, negro y rojo (al menos) (un juego de cuatro por cada equipo)

Alcohol del 90% (1L todo el grupo), Alcohol 70% (1L todo el grupo), Acetona (1 Quita esmalte por equipo), Cloroformo (Dra. Laura).

Materiales:

Cámara cromatográfica para 20x20 (preferentemente uno por cada tres equipos)

Plancha de calentamiento.

Método:

En la cámara cromatográfica, coloca el volumen suficiente de solvente a un nivel de 0.5 cm (o menos) por arriba del fondo. Tapar y colocarlo en una mesa que no será agitada. Contar el tiempo para que se estabilice el solvente.

Corta el pliego en cuadrados de 20x20 cm (manipúlalo con guantes). Con el lápiz, traza una recta paralela al lado inferior que quede a 1 cm del lado, como indica la fig. 1. En dicha recta (que llamaremos origen) marca cada cm un punto para identificar el origen (Fig. 2). Del otro lado marca otra línea (a la que le denominaremos frente). Calentar el papel a 60ºC por veinte minutos.

Los puntos en los extremos y a un cm de los extremos laterales no se usarán. Marca cada punto con un bolígrafo diferente. Después de las marcas de un equipo, dejar un punto en blanco y que el siguiente equipo marque los cuatro puntos, cada uno con una tinta diferente, y así para el tercer equipo. Verificar que hayan pasado cuando menos 40 minutos en que el solvente se ha estabilizado en la cámara cromatográfica.

Una vez estabilizado, colocar con mucho cuidado el papel colocando el lado del origen hacia abajo) pero mostrando hacia el frente las manchas. Tapar y sin mover, esperar a que la solución acidulada se adsorba hasta el frente. Una vez que llegue al frente, retirar el papel de la cámara y esperara a que se seque o calentar a 50-60ºC hasta que se seque. Con ayuda del lápiz, marcar las manchas que hayan quedado. Calcula el Factor de retención de cada mancha. Reportar si hay bolígrafos con tintas de composición semejante.

Recuerda que debes entregar reporte la semana siguiente. El reporte debe traer introducción, metodología (reactivos, materiales y método), resultados, conclusión, cuestionario y glosario contestados.

[pic 1]

Fig. 1. Esquema del cuadrado de papel, se muestra la línea de origen.

[pic 2]

Fig. 2. Esquema del papel para cromatografía, se muestra el frente y las marcas para colocar las manchas de tinta.

Cuestionario.

1. ¿En este sistema cuál es la fase móvil y cuál la estacionaria?
2. ¿Se usó soporte?¿Cuál es la función de la cámara?
3. ¿Cuál es la composición química de la fase estacionaria y de la móvil?
4. ¿Todas las tintas corrieron igual? ¿Cuáles son las que mostraron más manchas?
5. ¿Cuál es el Rf de las tintas negras? ¿Entre las tintas negras hubo manchas que se repitieran?
6. ¿Hubo manchas que se repitieran entre las tintas del mismo color?
7. ¿Podrías mejorar la separación cromatográfica?
8. Calcula la eficiencia de separación de las muestras que tuvieron dos manchas o más. ¿Qué podrías hacer para mejorar la eficiencia de la separación?
9. Calcula la resolución de las muestras que tuvieron dos manchas o más. ¿Qué podrías hacer para mejorar la resolución de la separación?
10. ¿Cuál es la naturaleza química de los colorantes utilizados en los bolígrafos?
11. ¿Qué tipos de vidrio existen para laboratorio? (Busca en la FEUM)
12. ¿Cómo definirías el frente y el origen?
13. ¿Por qué crees que no se utilizan los puntos en los extremos?
14. ¿Por qué deben ser manejados con guantes?
15. ¿Por qué esta práctica es imprecisa?

Glosario

Fase móvil

Fase estacionaria

Cromatografía

Rf

Resolución

Sensibilidad

Especificidad

Precisión

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