APLICACION TECNOLOGIAS Adn RECOMBINANTE

En las últimas décadas la tecnología de recombinación del ADN también conocida como ingeniería

genética, o más acertadamente recombinación genética in vitro, ha revolucionado la biología. El campo de la

salud es uno de los más beneficiados con el desarrollo de esta tecnología. Las investigaciones que se

realizan en este área están enfocadas al diagnóstico oportuno de enfermedades, así como su posible

tratamiento a través de la terapia con moléculas recombinantes e introducción de genes. Además, la

manipulación de genes proporcionará en el futuro una herramienta fundamental para la eliminación de

enfermedades mortales para el hombre. Por estas razones resulta útil que el médico esté familiarizado con

conceptos básicos sobre biología molecular, su aplicación en la investigación biomédica, y en especial con

sus posibles aplicaciones clínicas, conceptos estos que aparecen cada vez con mayor frecuencia en toda la

literatura biomédica, tanto básica como clínica.

El rápido progreso de la biotecnología y, de hecho, su propia existencia, es el resultado de utilizar

unas pocas técnicas que se describen a continuación.

Enzimas de restricción

El descubrimiento de las enzimas de restricción ha permitido a los investigadores manipular segmentos

específicos de ADN, facilitando enormemente el estudio de esta molécula de gran tamaño.

Las enzimas de restricción, o endonucleasas de restricción, reconocen secuencias de bases

específicas en el ADN doble hélice y cortan en lugares concretos ambas hebras del dúplex que contienen las

secuencias reconocidas. Las enzimas de restricción fueron obtenidas a partir de una gran variedad de

procariontes. Su función biológica en estos organismos consiste en eliminar mediante su actividad de

endonucleasa ADN foráneo que pudiera ingresar en una bacteria. El ADN del propio microorganismo no se

destruye porque los sitios reconocidos por sus propias enzimas de restricción se encuentran metilados.

Las enzimas de restricción reconocen secuencias específicas en el ADN de entre 4 a 8 pares de

bases e hidrolizan un enlace fosfodiéster en cada hebra de la región reconocida. Una característica notable

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de estos sitios de corte es que casi siempre son palíndromos, o una repetición invertida, y los puntos de corte

están dispuestos simétricamente (Figura 1).

Figura 1: Los puntos de corte están indicados por las flechas. El corte con Bam HI (izquierda) produce extremos simple

cadena o “adhesivos” y el corte con AluI (derecha) produce extremos doble cadena o “romos”. En cada hebra, la enzima

hidroliza el enlace fosfodiéster en el lado 3’ del eje de simetría.

Se han purificado y caracterizado más de 100 enzimas de restricción. Se nombran con una

abreviatura de tres letras que se refiere al organismo hospedador, por ej. Eco de Escherichia coli, Hin de

Haemophilus influenzae, Hae de Haemophilus aegyptius, seguida, en su caso, de una indicación de la cepa

en cuestión y de un número romano (en el caso que se haya identificado más de una enzima de restricción de

la misma cepa). Los cortes de estas enzimas pueden ocurrir en el centro mismo de la secuencia dejando lo

que se conoce como extremos “romos” con ADN doble cadena, o extremos “adhesivos” si el corte ocurre

corrido en una hebra y en la otra

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