Bacterias (tincion Gram)

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Practica Nº 06

FRACIONAMIENTO CELULAR

1.- INTRODUCCION:

Estos métodos consisten en la separación y aislamiento de diversos componentes, celulares para su posterior estudio mediante técnicas bioquímicas o de biología molecular. Se basan esencialmente en la homogeneización de los tejidos y la destrucción de los límites celulares por medio de diferentes procedimientos mecánicos o químicos, con anterior separación de las fracciones subcelulares de acuerdo con su masa, superficie y peso especifico (Robertis, et.al.1997).

Actualmente se utilizan diversos métodos de fraccionamiento celular. La mayoría están basados en la homogeneización mecánica de la célula generalmente en sacarosa a diferentes concentraciones (Robertis, et.al.1997).

Un procedimiento corriente de fraccionamiento es por centrifuga diferencial, este tipo de fraccionamiento celular se utiliza para subdividir a los componentes celulares en cuatro fracciones diferentes: nuclear, mitocondrial, microsómica y soluble; según la fuerza de gravitación requerida se utilizan para tal fin centrifugas ordinarias o preparativas, antes de la centrifugación todas las partículas están distribuidas homogéneamente, pero a medida que tiene lugar la centrifugación se depositan de acuerdo con sus respectivas velocidades de sedimentación (Robertis, et.al.1997).

Durante la centrifugación se utilizan altas velocidades y los organelos mayores y más densos sedimentan primero para luego volver a centrifugar el sobrenadante a mayor velocidad, obteniéndose de este modo por centrifugaciones sucesivas diferentes fracciones celulares. La primera fracción en obtenerse es la de los núcleos, la segunda de mitocondrias y lisosomas, la tercera de membranas del sistema vacuolar y finalmente la fracción correspondiente a los ribosomas (Morales & Zapata,1996).

2.- OBJETIVOS:

2.1 Objetivos Generales: - Ídem Guía

2.2 Objetivos Específicos:

• Aislar componentes celulares como el núcleo, las mitocondrias (célula animal) y cloroplastos (célula vegetal) mediante centrifugación.

• Conocer el tiempo y la velocidad necesaria con que se debe centrifugar una muestra para obtener los organelos específicos buscados como el núcleo, mitocondrias y cloroplastos.

• Reconocer el núcleo, las mitocondrias y los cloroplastos al verlas a través del microscopio óptico utilizado en laboratorio.

3.- MATERIALES: - Ídem Guía

4.- PROCEDIMIENTO: – Ídem Guía

5.- RESULTADOS:

5.1.- MUESTRA DE CLOROPLASTO:

5.2.- MUESTRA DE NUCLEOS:

5.3.- MUESTRA DE MITOCONDRIAS:

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