ESTUDIO DE ORGANELAS CELULARES: MITOCONDRIAS, LISOSOMAS, CLOROPLASTOS Y PLASTIDOS.

PROFESIONAL DE MEDICINA HUMANA

CURSO DE BIOLOGIA MOLECULAR

PRÁCTICA Nº 9

ESTUDIO DE ORGANELAS CELULARES: MITOCONDRIAS, LISOSOMAS, CLOROPLASTOS Y PLASTIDOS.

I. OBJETIVO:

Mediante el empleo de la técnica de coloración vital se observarán las mitocondrias presentes sólo en el citoplasma de las células Eucariotas, que vienen a constituir las “centrales de energía” porque producen y almacenan energía bajo la forma de ATP.

Las células tienen vesículas membranosas que contienen enzimas hidrolíticas que permiten la digestión intracelular y que corresponden a los lisosomas los cuales pueden pueden ser identificados en protozoarios con una tinción vital. Con el uso de suero fisiológico observar plastidos en las células vegetales eucarióticas, los que contienen pigmentos y pueden sintetizar y acumular diversas sustancias, como los Leucoplastos que son plastidos incoloros, los Amiloplastos que acumulan almidón, los Proteinoplastos que acumulan proteínas, los Elaioplastos que acumulan grasas y aceites esenciales. Los Cromoplastos son plastidos coloreados como el Caroteno que presenta un pigmento de color naranja, el Licopeno de color rojo, la Xantofila de color amarillo y los Cloroplastos que presentan un pigmento de color verde y cuya función principal es realizar la fotosíntesis.

II. MATERIALES POR MESA:

Muestra de: Células de epitelio bucal Hoja de Elodea (Cloroplastos) Ají amarillo (Xantofila) Zanahoria (caroteno) Papa (Amiloplastos) Betarraga (Antocianina) Cultivo de protozoarios (observación de lisosomas) Microscopios. Bisturí Pinza en punta Laminas y laminillas Colorante Rojo neutro Solución Verde Janus 1/10,000 Colorante Lugol Hisopos Mecheros de alcohol Guantes

III. PROCEDIMIENTO:

A) OBSERVACION DE MITOCONDRIA EN EPITELIO BUCAL:

1. Con una lámina limpia y mediante un raspado suave obtener una muestra de la mucosa bucal,

2. Realizar un frotis extendiendo la muestra sobre otra lámina,

3. Dejar secar la lámina con la muestra al medio ambiente,

4. Cubrir la muestra con Verde Janus durante 5 minutos,

21

5. Eliminar el exceso de colorante y dejar secar al medio ambiente,

6. Observar al microscopio con objetivos de 10x y 40x.

B) OBSERVACION DE LISOSOMAS en PROTOZOARIOS

1. Colocar en una lámina dos gotas cultivo de protozoarios y una gota del colorante rojo neutro, mezclar dejar reposar 2 minutos..

2. Cubrir con una laminilla y observar el preparado a 10x y 40x . Visualizar en el interior de los Paramecium a los lisosomas .

C.OBSERVACION DE PLASTIDOS EN VEGETALES:

CLOROPLASTOS: Se localizan en las hojas debajo de la epidermis superior.

1. Seleccionar una hoja joven de Elodea, colocarla sobre una gota de agua en una lamina portaobjeto.

2. Cubrir la muestra con una laminilla.

3. Observar al microscopio con

...