Bio0 Quimica

INTRODUCCION

La actividad catalítica de las enzimas depende estrictamente de la conformación de la proteína enzimática, es decir de su estructura tridimensional. Por ello, lo cambios conformados suelen ir asociados a cambios en la eficiencia catalítica de las enzimas .En muchos casos, estos cambios conformacionales son reversibles y tienen un significado fisiológico al permitir adaptar la forma transitoria la velocidad de una reacción enzimática a las necesidades de la célula.

En reacciones no catalizadoras por enzimas, la velocidad de reacción es proporcional a la concentración de cada uno de los reactantes. Las reacciones catalizadas por enzimas con algo diferentes, cuando se mide el efecto de la concentración del sustrato sobre la velocidad de reacción, en presencia de una cantidad constante de enzima, se encuentra que a muy bajas concentraciones de sustrato, cantidades incrementadas de ese causa velocidades marcadamente incrementadas.

Mediciones cuantitativas de la actividad y cinética enzimática son necesarias para comprender su fusión biológica y para determinar la cantidad presente en muestras biológicas.

OBJETIVOS:

 Determinar los principales factores que tienen que ver con la cinética de las enzimas.

MATERIAL Y MÉTODOS:

 MATERIAL

 Solución de almidón bufferado a la concentración de 400 mg/litro

 Amilasa(frutaenzima)

 Ácido clorhídrico 0.1 N

 Solución yodada

 Buffer fosfato

 Espectrofotómetro

 Tubos de ensayo

 MÉTODO

Obtención de factor de conversión:

En factor de conversión se obtiene a partir de la curva de calibración, que se describe a continuación.

COMPONENTES BLANCO ESTANDARES

1 2 3 4 5

Almidón bufferado (ml) 0.5 1 1.5 2 2.5

Agua destilada (ml) 3 2.5 2 1.5 1 0.5

MEZCLAR

HCL 0.1 M (ml) 2.5 2.5 2.5 2.5 2.5 2.5

MEZCLAR

Solución yodada (ml) 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5

 Mezclar por inversión y dejar reposar por 5 minutos

 Hacer la lectura en espectrofotómetro a 600 nm

 Calcular el factor de calibración mediante la siguiente formula:

Fx =mg almidon (estandares)

Absorvancia (estandares)

TUBOS Tubo 1 Tubo 2 Tubo 3 Tubo 4 Tubo 5

Fx Fx=0.5/0.086

Fx=5.8139 Fx=1/0.099

Fx=10.1010 Fx=1.5/0.128

Fx=11.7187 Fx=2/0.166

Fx=12.0481 Fx=2.5/0.187

Fx=13.3689

Fx= (Fx1 + Fx2 + Fx3 + Fx4 + Fx5)/5

Hallando Factor de conversión “Fx”:

Fx= (5.8139 + 10.1010 + 11.7187 + 12.0481 + 13.3689)/5

Fx=10.6191

Evolución de actividad enzimática:

Evaluar la actividad enzimática

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