Conservacion de hongos filamentosos

CONSERVACION DE HONGOS FILAMENTOSOS

DIEGO ALEJANDRO AVILA RINCÓN-117003105

SANDRA MILENA HERNANDEZ TRUJILLO-117003116

OLGA DANIELA ROMERO ROBAYO-117003134

UNIVERSIDAD DE LOS LLANOS

FACULTAD DE CIENCIAS AGROPECUARIAS Y RECURSOS NATURALES

INGENIERIA AGROINDUSTRIAL

RESUMEN: En esta práctica se  determinó la pureza del hongo con ayuda del azul de lactofenol  para  verificar que se estaba trabajando con trichoderma harzianum, seguidamente se tomó el hongo   y  se le  realizó la conservación mediante el método a mediano plazo utilizando el aceite mineral, después se llevó a cabo la obtención de conidios por medio de perlas de vidrio causando el desprendimiento de estos,  posteriormente se hizo el recuento en la cámara Neubawer a partir de las diluciones hechas en la práctica.

MATERIALES Y METODOS

Pruebas de pureza: Se realizó la  preparación de azul de lactofenol para verificar la pureza del microorganismo.

Conservación en aceite mineral: Para esta parte a cada lado de la mesa se entregó una caja con un cultivo de Trichoderma harzianum, a partir de esta caja se obtuvo una muestra utilizando la pipeta pasteur invertida, de tal manera que se obtuviera un disco de 5mm de diámetro que contiene un fragmento de agar y el microorganismo. Bajo condiciones de esterilidad, se destapo el tubo eppendorf y se depositó dentro el disco de agar, se tapó el tubo y posteriormente se  guardó  en refrigeración. Se repitió el mismo procedimiento para el tubo eppendorf vacio.

Al término de 5 días conservación, se colocó los discos que se  depositaron dentro de los tubos eppendorf en agar saboureaud. Finalmente se midió desde el día 1 con una regla el diámetro del crecimiento del micelio y se realizó una curva de crecimiento.

Desprendimiento de conidios con perlas de vidrio: Se tomó el cultivo de Trichoderma y bajo condiciones asépticas se destapo la caja seguidamente se adiciono los 5 ml de solución salina al 0.85% p/v con Tween al 0.1% v/v, posteriormente se colocó las tres perlas de vidrio y  se empezó  a moverlas con movimientos de rotación para favorecer el desprendimiento de conidios. Con la pipeta pasteur se tomó la totalidad de muestra y  se transfirió  al tubo de 12x 754 mm solo.

A partir de este tubo se preparó diluciones decimales 10–1 y 10–2, posteriormente  se  realizó el recuento en cámara utilizando las dos diluciones. Finalmente se conservó esta suspensión a temperatura de refrigeración.

RESULTADOS Y DISCUSIONES

Figura 1.  Observación microscópica del Trichoderma harzianum.

Figura 2. Crecimiento del Trichoderma harzianum (conservado en aceite mineral) en agar PDA.

[pic 1]

Figura 3. Recuento en cámara de Neubawer (selección de celdas).

[pic 2]

Tabla #1. Reconteo de conidios en la cámara de Neubawer.

Tabla #2: características del trichoderma harzianum

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