Curva de crecimiento de no filamentoso.

1. Definición: Clostridium perfringens es un contaminante común de los alimentos crudos y de los ingredientes secos de muchos alimentos. Este microorganismo, por su capacidad de producir esporas resistentes, puede sobrevivir en bajo número en algunos alimentos tratados térmicamente y al ser almacenados inadecuadamente o recalentados se puede incrementar su número y producir una intoxicación.

Es un microorganismo telúrico ampliamente distribuido en la naturaleza (suelo, polvo, sedimento marino) que se encuentra en el intestino de hombres sanos, así como en ganado porcino y bovino, de otro lado es un microorganismo patógeno para los animales (enterotoxemias) y para el hombre (toxoinfecciones alimentarias: Cl perfringens tipo A, y enteritis necrosante tipo C). Esta bacteria se caracteriza por reducir el sulfito, así como otras especies de Clostridium, cuando se realiza el recuento de Clostridium sulfito reductor este grupo se emplear como indicador de la posible presencia de Clostridium patógenos, estos microorganismos por su naturaleza se encuentran en alimentos con alto contenido de proteínas y bajo condiciones de anaerobiosis.

2. Materiales Campana de anaerobiosis Pipetas estériles Asa bacteriológica Láminas porta objetos

3. Medios de cultivo Agar Triptona-Sulfito neomicina (TSN) Medio tioglicolato Medios nitritos-movilidad Medio gelatina lactosa.

4. Reactivos Polvo de zinc Reactivo de Griess Frasco de dilución con 90 mL de agua peptonada bufferada Sobre de anaerobiosis 2 tubos de 16 x 150 mm tapa rosca con 9 mL de agua peptonada bufferada Solución salina 0.85% Aceite de inmersión Colorantes de Gram Indicador de oxido-reducción

5. Equipos Incubadora a 35oC Baño de agua a 46oC Microscopio Contador de colonias Pipeteador

6. Procedimiento

RECUENTO DE Clostridium sulfito reductor PNT-AL-016 Basado en el manual de la USDA, Capítulo 13 y norma EN 13401

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* Realice diluciones seriadas utilizando el procedimiento descrito en el PNT-01 * Siembre 1 mL en profundidad, adicione de 15-20 ml del agar TSC. * Homogenice la muestra, deje secar * Lleve las cajas a cámara de anaerobiosis (no olvide colocar el indicador de oxidoreducción y el sobre de anaerobiosis, siguiendo las instrucciones de la casa comercial) * Incube todas las placas por 48 h a 35oC. Nota 1. Clostridium por ser anaeróbico tiene un metabolismo más lento por lo que si ud después de 48 horas no observa crecimiento, reincube nuevamente hasta por 24 horas más antes de informar el recuento.

7. Recuento. Después de la incubación, cuente como colonias presuntivas de Clostridium sulfito reductor, las colonias negras con halo opaco de 2-4 mm. Multiplique el número de colonias por el inverso de la dilución para obtener el recuento presuntivo de Clostridium.

8. Confirmación Selección

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