LIOFILIZACIÓN, PULVERIZACIÓN, DETERMINACIÓN DE LIPIDOS, EXTRACCIÓN DE PLAGUICIDAS ORGANOCLORADOS Y DETECCIÓN POR CROMATOGRAFÍA DE GASES

6.3.4 Liofilización y pulverización

Una vez congelado se introdujo al liofilizador LABCONCO modelo 12, a una temperatura de -44° C con una presión de 133-3 mbar durante 72 horas, una vez liofilizada la muestra se volvió a pesar y se tomo registro para determinar el porcentaje de eliminación de humedad. Posteriormente, con la ayuda de un mortero con pistilo se pulverizo la muestra de hígado, para el caso de musculo fue necesario el empleo de un rayador de cocina de 1 mm de diámetro de poro, ya que la muestra presentaba una consistencia fibrosa.

6.3.5 Determinación de lípidos

Para la determinación de lípidos se empleo el método 3545A de la EPA (2007) el cual involucra una extracción acelerada con solvente (ASE por sus siglas en ingles), mediante el uso del equipo ASE 150, con éter de petróleo como solvente, una temperatura de 125° C a una presión de 1500 a 2000 PSI durante un tiempo de extracción de 24 min. Posteriormente se recolecta en un crisol a peso constante y se deja volatizar el éter de petróleo a temperatura ambiente durante 3 días, al final, por diferencia de peso se determina el porcentaje de lípido de la muestra.

6.3.6 Extracción de plaguicidas organoclorados de hígado y musculo (ASE – EPA 3545A)

Para la extracción de pOCs en hígado y musculo se empleo el método 3545A de la EPA (2007) con modificaciones, el cual involucra una extracción acelerada con solvente, mediante el uso del equipo ASE 150, celdas de acero inoxidable de 5 ml se adecuo con un filtro de celulosa (Canitec 056781) en la parte inferior de la celda, para proceder a introducir 1 g de muestra seca previamente mezclado con 0.8 g de tierra de diatomeas (Dionex 062819), se utilizo acetona-hexano 15:85 (v/v) como solvente, a una temperatura de 100° C a una presión de 1500 a 2000 PSI durante un tiempo de extracción de 14 min, posterior a la extracción se evaporo hasta sequedad por minivap a 35° C con un flujo de N2 para retener los plaguicidas y resuspendío con 1 ml de hexano, después de resuspenderse, se procedió a realizar una limpieza para su posterior detección como se indica en los puntos 6.4.7 y 6.4.8 de este apartado respectivamente. Los resultados fueron reportados en µg de pOCs por 1 gramo de lípido.

6.4.7 Limpieza (PAM 302 C1)

La limpieza PAM 302 se aplicó a las técnicas para la extracción de pOCs de hígado, musculo y suero, modificado del Manual Analítico de Plaguicidas de la FDA (PAM, 1994). En donde a una columna plástica se adherido un tapón de fibra de vidrio, una vez tapada la columna se agregó 1 g de florisil (malla 60-100) (Sigma-Aldrich 220744) y 0.2 g de sulfato de sodio anhidro (Fluka Analytical 25896), a la columna con florisil se le adiciono 5 ml de hexano y se depuro sin dejar que el florisil se secara, se agregó el extracto y se eluyo con 15 ml diclorometano-acetonitrilo-hexano 50/1.5/48.5 (v/v/v). Una vez concluida la limpieza se evaporo el extracto hasta sequedad por minivap a 35° C con un flujo de N2 para retener los plaguicidas, al final se resuspendío con 1 ml de ciclohexano y se almaceno en un vial (Agilent technologies) de 1.5 ml.

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