Técnica histológica

Técnica histológica

Definición: La técnica histológica es una serie secuencial de pasos a través de los cuales una

muestra de tejido llega a transformarse en delgados cortes coloreados capaces de ser

observados al microscopio. (Dr. Gabriel Magariños).

Paso Objetivos Medios usuales

Obtención Promoveer el material para su estudio al microscopio Biopsia

- Resección quirúrgica

- Autopsia

Fijación Preservar el material

- Evitar la autólisis

- Eliminar los microorganismos Formol al 10 %

- Bouin

- Glutaraldehído

Inclusión Embeber el material en un medio

fácil de cortar en fetas muy

delgadas Parafina

- Acrílicos

- Resinas Epoxi

Corte Lograr láminas muy delgadas que

sean atravesadas por la luz Micrótomo rotatorio

- M. de deslizamiento

- Ultramicrótomo

Coloración Visualizar los tejidos

- Identificar moléculas en ellos

(Histoquímica) Hematoxilina - eosina

- Tricrómicos

- Histoquímica

Montaje Preservar el corte, manteniéndolo

aislado del aire y deshidratado Bálsamo del Canadá

- Medios plásticos

Obtención

Consiste en la provisión del material que se desea estudiar por medio del microscopio. El método seleccionado debe ser el adecuado para cada tipo de material. En todos los casos el instrumental con el cual se seccionan los tejidos debe estar muy afilado para evitar aplastar sus elementos, así como se debe evitar cualquier otro tipo de maltrato en su manipulación. Los principales métodos empleados son: la biopsia, la resección quirúrgica y la autopsia.

- La biopsia consiste en la extracción de pequeños fragmentos de tejido de un

organismo vivo.

- La resección quirúrgica consiste en la extirpación de órganos completos o de

grandes partes de los mismos, a través de un procedimiento quirúrgico.

- La autopsia o necropsia es el examen de los órganos luego de la muerte,

generalmente con el objetivo de determinar las causas de la misma.

Fijación

La fijación es en esencia un método para la preservación de la morfología y la composición química de las células y los tejidos. Consiste en producir la muerte de las células, de manera tal que las estructuras que poseían éstas en el estado viviente se conserven con un mínimo de modificaciones, a lo largo del tiempo y de los subsiguientes pasos de la técnica. Asimismo algunos métodos tratan de conservar intacta su composición química.

La fijación debe realizarse inmediatamente de extraer las células del organismo, para evitar las lesiones agónicas ocasionadas por la anoxia, que inicialmente producen cambios osmóticos y luego alteraciones estructurales y bioquímicas más profundas, fenómenos conocidos en conjunto como autólisis. Por el mismo motivo los fijadores deben actuar sobre fragmentos relativamente pequeños de tejidos (como regla general menos de 1 cm cúbico), para que la difusión del fijador desde las superficies hasta la parte central del bloque tisular se haga en un tiempo reducido.

Propiedades de los fijadores:

- Producen una rápida muerte celular, evitando la autólisis

- Preservan la morfología celular y tisular

- Preservan la composición química

- Penetran a los tejidos con relativa rapidez

- Facilitan la coloración posterior

- Inhiben el crecimiento microbiano y por lo tanto la putrefacción

- Aumentan la consistencia de los tejidos

- Algunos de ellos colorean sustancias de los tejidos

Efectos indeseables de algunos fijadores:

- Retraen los tejidos

- Precipitan en forma de cristales

- Endurecen demasiado las muestras

- Poseen olor desagradable e irritan la piel y las mucosas

- Producen alteraciones importantes a nivel molecular

- Producen alteraciones importantes a nivel ultraestructural

Físicos Calor

- Desecación

- Microondas

Químicos

simples Alcoholes Metanol

- Etanol

Aldehídos Formaldehído

- Glutaraldehído

Acidos Acético

- Pícrico

- Osmico

Sales Bicromato de potasio

- Bicloruro de mercurio

Mezclas de quimicos Carnoy Alcohol etílico +

Acido acético

Bouin Acido pícrico +

Formol +

Acido acético

Zenker Bicromato de potasio +

Bicloruro de mercurio +

Acido acético

FaGlu Formaldehído +

Glutaraldehído

Deshidratación

Las piezas al ser retiradas del fijador, o después de haberlas lavado, están embebidas en agua; impidiendo que sean penetradas por la parafina. Por lo tanto, en primer lugar, debemos deshidratar los tejidos sumergiéndolos en líquidos anhidros, ávidos de agua. Para evitar alteraciones

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