Omar

A) ¿Cuál es el uso del caldo?

Medio usado como diluyente y para enriquecimiento bacteriano a partir de alimentos y otros materiales de interés sanitario.

B) Fundamento.

Medio de enriquecimiento no selectivo, recomendado para ser utilizado en lugar de solución fisiológica para recuperar células de enterobacterias dañadas por procesos fisicoquímicos, a los que ha sido sometido el alimento. Si es utilizado como medio base para la fermentación de hidratos de carbono, se debe adicionar el indicador de Andrade y el hidrato de carbono en cuestión.

Fórmula (en gramos por litro) Instrucciones

Peptona de carne 10.0 Suspender 15 g de polvo en 1 litro de agua destilada. Mezclar bien y distribuir. Esterilizar en autoclave a 121°C durante 15 minutos.

Cloruro de sodio 5.0

pH final: 7.2 ± 0.2

C) Temperatura recomendadas para la incubación.

Incubación

Aeróbica, a 35-37 ºC durante 18-24 horas.

E) ¿Qué resultados da en cuanto a crecimiento?

Microorganismos Crecimiento

Escherichia coli ATCC 25922 Bueno

Staphylococcus aureus ATCC 25923 Bueno

Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853 Bueno

Control Negativo Resultado

Medio sin inocular Sin cambio

Montaje de cubreobjetos

El cubreobjetos es casi lo que más se necesita en una muestra para microscopio para proteger la delicada sección y suministrar un camino óptico claro. Elegir un tamaño que solo cubra la sección. Los tamaños estándar son 22x22 mm, 20x30 mm, 20x40 mm, etc. Los cubreobjetos vienen en una serie de grosores designados como los siguientes:

Designación Grosor

#1 0.13-0.17 mm

#1½ 0.16-0.19 mm

#2 0.17-0.25 mm

La mayoría de los objetivos de los microscopios están corregidos ópticamente para el cubreobjetos para un grosor único- generalmente 0.17 mm o #1½- de modo que hay que asegurarse esto. El grosor del cubreobjetos están estampados sobre los objetivos bien como "17" o "0.17". Cuando se hace en microscopios extremadamente críticos en tres dimensiones (deconvolucion o microscopio confocal) el grosor del cubreobjetos debería ser medido con un micrómetro y estandarizado excatamente a 0.17 mm.

El cubreobjetos está pegado alobjeto con un cemento soluble en agua, alcohol, o xileno, teniendo un índice de refracción próximo al de este cristal (1.515). Hay un gran número de adhesivos de montaje comerciales incluyendo Permount, Bálsamo de Canadá, Merkoglas, y otros. Los cubreobjetos de plástico pueden ser comprados y usados, sin embargo debido a la refringencia del plástico, la técnica óptica de DIC no trabajará.

Procedimiento

Mantener los portaobjetos en xileno mientras le toca el turno de ser procesado. Debes guardar los portaobjetos en contenedores con muecas para un manejo fácil. No permitir que los discos se sequen antes de añadir el medio de montaje o los cortes se dañarán irreversiblemente.

1.-Quitar el portaobjetos y con un Kimwipe limpiar suavemente alrededor de los bordes para quitar el exceso de xileno.

2.- Añadir 1-3 gotas de medio de montaje. El cemento debe estar bastante líquido pero no acuoso. si el medio de montaje está demasiado espeso, diluir en el solvente apropiado (xileno, alcohol, agua).

3.- Cuidadosamente poner el borde del cubreobjetos (margen corto) sobre el portaobjetos y con un puntero o un forceps bajar lentamente hasta que toque la parte superior del adhesivo. Parar un momento para permitir que se quiten las burbujas de aire.

4.- Continuar bajando el cubreobjetos hasta que todas las gotas de adhesivo toquen el cubreobjetos, entonces detenerse otra vez para permitir que las gotas se mezclen en una. El objetivo es permitir al adhesivo que fluya sobre los cortes sin formar burbujas. Las burbujas son extremadamente difíciles de eliminar.

5.- Una vez el adhesivo ha formado una capa continua, dejar que el cubreobjetos se acomode en su lugar en la parte superior del portaobjetos.

6.- Poner el portaobjetos en una placa calefactora a 42ºC o en un horno y dejar que se seque como mucho overnight. Usar una toalla de papel para quitar el exceso de pegamento sobre el portaobjetos en la bandeja calefactora.

Medios de montaje para cubreobjetos

La siguiente tabla es una lista corta de medios de montaje habituales, sus sinónimos, y (si es posible) sus usos apropiados. Tener en cuenta que, hasta cierto punto, la elección del medio de montaje es una preferencia personal basada en historia y corte.

Medio de montaje Compañía* Solubilidad** Comentario

Bálsamo de Canadá Fisher, Sigma X, T Históricamente importante pero raramente usado debido a su coste y

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