EXTRACCIÓN Y VISUALIZACIÓN DE ARN

II. EXTRACCIÓN Y VISUALIZACIÓN DE ARN

Método Trizol®

RESUMEN.

Existen una gran diversidad de métodos que se pueden utilizar para la extracción y visualización de ARN.

En la presente práctica se purifico ARN de muestras vegetales de Helecho, implementando el método de TRIzol®. Se comprobó que este mantuvo la integridad de ARN durante las etapas que el método conlleva. Culminando en el aislamiento de ARN puro de una de las muestras tratadas por este método.

En la técnica la muestra se macera para que las células del tejido vegetal estén más expuestas a los reactivos y asegurar la obtención de ARN. Al adicionar cloroformo seguida de la centrifugación la mezcla se separa en tres fases; la inferior que es una fase de tinción roja donde se encuentra el cloroformo-fenol, una fase intermedia incolora y la fase acuosa en donde exclusivamente permanece el ARN. El ARN que se encuentra en la fase acuosa es recuperado por precipitación incorporando alcohol isopropílico a esta fase.

La ventaja de este método es que después de que el ARN es removido de la fase acuosa, tanto el ARN como las proteínas que se encuentran en las otras fases pueden ser recuperadas de la misma manera que este, es decir por medio de la precipitación de Alcohol isopropílico.

Este proceso es efectivo tanto en tejido animal como vegetal, esto indica que es un método de gran utilidad para la implementación en el laboratorio de biología molecular obteniendo muy buenos resultados.

Como es de esperarse al estar trabajando con elementos tan frágiles como lo es el ARN, el procedimiento se debe realizar bajo rigurosas condiciones ya establecidas, teniendo la precaución de tomar tiempos, temperaturas y técnicas adecuadas, para asegurar el buen manejo y la obtención y aislamiento del ARN lo más puro posible.

En esta práctica solamente se consiguió la observación del ARN de una de las muestras, ya que no se mantuvo la integridad del otro debido a que la técnica fue realizada incorrectamente, pero el result

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ado de la otra muestra es suficiente para indicar que este método es eficaz para el aislamiento de ARN siepre y cuando se realiza apropiadamente.

INTRODUCCIÓN.

El ARN es uno de los dos ácidos nucleicos existentes, este está formado por una sola cadena, lo constituyen nucleótidos de ribosa, sus cuatro bases son A, G, C y U. El ARN es la molécula que media las etapas de la síntesis de proteínas.

Existen tres tipos de ARN:

ARNm: Es el molde a para la síntesis de proteínas.

ARNt: Transporta los aminoácidos hacia los ribosomas para la síntesis de proteínas.

ARNr: Se encuentra en el ribosoma, participa en la traducción de

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