PRÁCTICO N°8: EXTRACCIÓN Y CARACTERIZACIÓN DE PROTEÍNAS.
Enviado por Frcjfcbhx • 20 de Agosto de 2016 • Biografía • 4.088 Palabras (17 Páginas) • 209 Visitas
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PRÁCTICO N°8: EXTRACCIÓN Y CARACTERIZACIÓN DE PROTEÍNAS.
OBJETIVO:
- Reconocer y diferenciar la presencia de un péptido o proteína en diferentes sustancias de uso común.
- Extraer proteínas de algunas sustancias y reconocer su naturaleza proteica.
- Investigar la presencia de glúcidos reductores en el suero obtenido al desnaturalizar la proteína de la leche de vaca.
MATERIALES:
- Vaso de Bohemia, varilla de vidrio, mechero, trípode, tela metálica, gradilla, tubos de ensayo, termómetro, papel de filtro, cuenta gotas, encendedor, centrifugadora manual.
SUSTANCIAS:
- Leche en polvo, gelatina sin sabor, clara de huevo, edulcorante “Aspartamo”.
- Ácido Etanoico 2,0M, NaOH al 10%, NaOH (ac) 20%, CuSO4 al 1%, HNO3 conc., Reactivo de Millón,
Pb (CH3COO)2 (ac) al 5%, Fehling A, Fehling B, Etanol.
PROCEDIMIENTO:
- A- EXTRACCIÓN DE LA CASEÍNA DE LA LECHE
- Preparar aproximadamente 25 mL de leche en un vaso de Bohemia, disolviendo dos cucharadas de leche en polvo en cantidad de agua suficiente.
- Calentar hasta 40ºC, agitando con varilla de vidrio para homogeneizar.
- Adicionar por goteo 3mL (60 gotas) de ácido etanoico 2M, agitando en forma continua con varilla de vidrio.
- Centrifugar lo preparado, separar el coágulo formado y reservar el líquido para verificar presencia de glúcidos reductores.
- Al coágulo obtenido agregarle etanol y volver a centrifugar.
- Secar en papel de filtro el coágulo y fraccionarlo en cuatro tubos de ensayo para proceder a realizar reacciones de reconocimiento.
B- CARACTERIZACIÓN
- REACCIÓN de BIURET
- Agregar sobre la caseína del primer tubo, 20 gotas de NaOH al 10%, agitar bien y adicionar 2 gotas de CuSO4 (ac) al 1%. Coloración violeta amatista, indica presencia de enlace peptídico.
- REACCIÓN de HELLER o XANTOPROTEICA
- Agregar sobre la caseína del segundo tubo de ensayo, 10 gotas de HNO3 (conc). Agitar.
Coloración amarilla, indica presencia de proteínas con anillos bencénicos.
- REACCIÓN de MILLÓN
- Adicionar sobre la caseína del tercer tubo de ensayo 5 gotas de Reactivo de Millón. Calentar suavemente cuidando no carbonizar la proteína. Una coloración parecida a la de la carne hervida, indica presencia de proteínas con grupos fenólicos.
- REACCIÓN DE AMINOÁCIDOS AZUFRADOS
- Agregar al cuarto tubo de ensayo con caseína, 1mL (20 gotas) de solución de hidróxido de sodio al 20%. Añadir 5 gotas de solución de acetato de plomo al 5%. Calentar hasta ebullición.
La formación de un precipitado de color oscuro, indica presencia de proteínas que tienen en su composición
aminoácidos con azufre.
- RECONOCIMIENTO DE PRESENCIA DE GLÚCIDOS REDUCTORES
- Investigar en el líquido reservadode al desnaturalizar a la proteína de la leche, la presencia de glúcidos reductores, de acuerdo a los ensayos realizados en el práctico “Propiedades de Glúcidos”.
- Determine qué glúcido/s , contiene la leche de vaca utilizada.
- REPETIR LOS ENSAYOS de CARACTERIZACIÓN ANTERIORES, PARA: GELATINA, ASPARTAMO Y OVOALBÚMINA (CLARA DE HUEVO).
3- GELATINA
- Disolver una cucharada de gelatina en agua suficiente y obtener una solución.
- Separar en cuatro tubos de ensayo, aproximadamente 1mL en cada uno y proceder a realizar los ensayos de caracterización hechos para la caseína.
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