AISLAMIENTO, DESCRIPCIÓN E IDENTIFICACIÓN DE UNA BACTERIA AMBIENTAL

 AISLAMIENTO, DESCRIPCIÓN E IDENTIFICACIÓN DE UNA BACTERIA AMBIENTAL

Laura Alejandra Alvarez  (laalvarezc@uqvirtual.edu.co).

Sara Lizeth Cuellar (slcuellaro@uqvirtual.edu.co).

Nicole Loana Murillo (nlmurilloc@uqvirtual.edu.co).

Docente: Fabiana

Introducción

Las bacterias son las células unicelulares vivas más pequeños y al mismo tiempo más abundantes del planeta Tierra, las cuales tienen la capacidad de estar en distintas partes, desde el suelo, hasta en nuestro propio cuerpo. Ellas se encuentran en el agua, suelo, aire, alimentos, vegetación, animales y seres humanos (piel y tracto digestivo) (Sáez J, et al., 2010).

Las bacterias se reproducen por fisión binaria y se caracterizan por su forma, tamaño, y estructura. Uno de los sistemas más importantes para la identificación de microorganismos es observar su crecimiento en sustancias alimenticias artificiales preparadas en el laboratorio. El material alimenticio en el que crecen los microorganismos es el medio de cultivo y el crecimiento de los microorganismos es el cultivo. (Casado et al, 2012).

Para que las bacterias crezcan adecuadamente en un medio de cultivo artificial, este debe reunir una serie de condiciones como lo son: la temperatura, el grado de humedad y la presión de oxigeno adecuadas, así como un grado correcto de acidez o alcalinidad. Un medio de cultivo debe contener los nutrientes y factores de crecimiento necesarios, así como también debe estar exento de todo microorganismo contaminante (Casado et al., 2012).

Al momento de identificar una población de bacterias presentes en el ambiente, estas pueden ser aisladas en un medio de cultivo de aislamiento primario ya que este permite el desarrollo de una gran variedad de microorganismos, además está compuesto por una mezcla de nutrientes, que benefician a la propagación de estas en el laboratorio (Casado et al., 2012). Una técnica fundamental en microbiología es un cultivo clonal o cultivo puro donde un solo organismo y su progenie crecen libres de todo contaminante lo que facilita el estudio de este (Gamazo et al, 2005). Esto puede lograrse por medio de sustancias inhibitorias como los antibióticos, o ciertas concentraciones de algunas sales; o simplemente agregando sustancias que sea utilizada únicamente por el tipo de bacteria que se desea aislar (Rodríguez et al., 2005).

Acerca de los medios diferenciales, los cuales se utilizan para poner en evidencia características bioquímicas que ayuden a diferenciar géneros o especies de las bacterias. La adición de un azúcar fermentable o un sustrato metabolizable se utilizan para este fin. El medio MacConkey es un medio diferencial porque permite diferenciar las colonias rojas características de las bacterias que atacan a la lactosa de las que no la atacan que son incoloras (Casado et al., 2012)

Actualmente, la identificación bacteriana se realiza por medio de métodos convencionales, basados en las características fenotípicas, puesto que su realización y coste los hace más asequibles. Los métodos genotípicos suelen reservarse para las bacterias que no se pueden identificar con métodos convencionales. Los esquemas tradicionales de identificación fenotípica bacteriana se basan en las características observables de las bacterias, como su morfología, desarrollo, y propiedades bioquímicas y metabólicas. (Fernández et al., 2010).

En efecto, son usadas las técnicas de tinciones diferenciales o compuestas, llamadas así porque requieren de combinaciones de dos o más colorantes, como en la técnica de Gram que permite diferenciar dos grandes grupos de bacterias: las Gram positivas y las Gram negativas. La técnica se basa en propiedades estructurales de la pared celular (Olivas & Alarcón, 2001). La membrana citoplasmática de las bacterias Gram positivas, aparte de ser una estructura obligada, se ubica inmediatamente por debajo de la pared bacteriana. Algunos autores mencionan que entre las dos estructuras existe un pequeñísimo espacio, que en realidad la mayoría de los investigadores lo califican como inexistente; en las bacterias Gram negativas aparece una estructura característica de este tipo de bacterias  y no se reporta en las Gram positivas, a la que los autores se refieren como membrana externa (Montoya, 2008).

Las Gram positivas poseen una pared de péptidoglicano gruesa y  con pocos lípidos y las bacterias Gram negativas en cambio tienen una pared de péptidoglicano más delgada recubierta por una envoltura fundamentalmente lipídica (Macarulla&Goñi, 1994).

Las tinciones selectivas al igual que las tinciones diferenciales, se basan en el hecho de que distintas estructuras celulares tienen distinta composición química, de modo que se tiñen selectivamente con ciertos colorantes. Son ejemplos de tinciones selectivas: Tinción de esporas, de flagelos, y de corpúsculos metacromáticos (Moreno &Albarracín, 2012).

De acuerdo a los enunciados anteriores, el presente trabajo tiene como finalidad el aislamiento e identificación de una colonia de bacterias obtenida de un medio cultivado directamente, el cual se dejó expuesto al aire por algunos minutos.

Metodologías

Preparación del medio de cultivo: para la correcta elaboración del medio de cultivo se observo la composición e instructivo; luego se verifico las cantidades necesarias a pesar para el volumen deseado y así empezar el proceso de elaboración.

Cultivo directo: Para el crecimiento del cultivo mixto se sembró la muestra colocando la caja de Petri durante 10 minutos cerca de una alcantarilla, teniendo en cuenta que la caja se abrió cerca de una zona bastante transcurrida por autos y peatones, se empleó Agar nutritivo que por su composición permite el crecimiento de microorganismos que no son estrictos en su  nutrición.

Cultivo puro: Se seleccionó una colonia de las distintas que crecieron en el cultivo mixto y se hizo una breve descripción macro de la sepa, posteriormente se hizo la siembra  de manera indirecta en Agar nutritivo (empleando siembra por estría), y en Agar MacConkey (empleando la siembra de estría por agotamiento; de esta manera se pudo obtener un cultivo puro.

Llevando el registro de desarrollo con intervalos de 24 horas se observó el crecimiento del microorganismo aislado creando nuevas colonias.  

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