AMILASA SALIVAL

AMILASA SALIVAL

Dalliver González, , German Gutiérrez, Gustavo Melán.

dalliem@hotmail.com; gergu79@hotmail.com; gustavo7304@hotmail

Universidad Santiago de Cali, Facultad de Ciencias Básicas, Programa de Química, Laboratorio de Bioquímica.

Santiago de Cali Octubre 16 de 2013.

RESUMEN

En esta práctica se midió la actividad de la enzima amilasa salival (en soluciones al 10%, 5%, 2% y 1%). Se mezcló cada dilución con una solución de almidón y amortiguador de pH 6.8 para realizar pruebas con yodo midiendo el tiempo en el que se llevaba a cabo la reacción, la cual se indica con un cambio de coloración. La muestra de saliva tenía un pH de 7.00 y la reacción se dio más rápido con la solución al 10%. Luego de esta primera parte, se midió la velocidad de reacción de la dilución de saliva al 2% de la misma forma pero esta vez a diferentes temperaturas en baño de hielo, baño a 37ºC, baño en agua hirviendo y a temperatura ambiente. La reacción se dio más rápido a temperatura ambiente; se concluyó que la temperatura óptima estaba en 37ºC, correspondiente a la temperatura corporal. Por último, la velocidad de reacción de la misma dilución de saliva al 2%, se midió a diferentes pH (3.4, 5, 6.8, 8 y 10). La reacción se dio pronto a pH 6.8 y 8, pues a pH extremos (pH 3.4 y 10), la enzima se desnaturaliza perdiendo actividad enzimática. Por tanto el pH óptimo de la enzima fue neutro.

PALABRAS CLAVE: Amilasa salival, concentración, almidón, yodo, temperatura, amortiguador, pH, velocidad, tiempo.

INTRODUCCIÓN.

Las enzimas son proteínas cuya acción biológica consiste en la catálisis de las reacciones químicas del metabolismo, las cuales son muy lentas sin la intervención de este.

Las enzimas solamente actúan cuando la temperatura del sustrato está dentro de los límites de la vida, también requieren un pH que depende del tipo de enzima y sustrato. Existen enzimas que necesitan combinarse con determinadas sustancias denominadas activadores, mientras que al combinarse con otras se llaman inhibidores que cesan su acción.

Las enzimas se clasifican según la función de la reacción que cataliza en dos grupos: hidrolasas y desmolasas.

Las hidrolasas catalizan las reacciones de hidrólisis de los principios inmediatos, descomponiendo en sus componentes elementales (procesos digestivos). Entre estas enzimas se encuentran: las carbohidrasas (poliasas y oliasa), esterasas (lipasas y fosfatasas), amidasas (proteasas).

Las desmolasas son reacciones en las que se produce la desintegración de los componentes elementales de los principios inmediatos liberándose una gran cantidad de energía. Estas presentas los siguientes grupos: deshidrogenasas, oxidasas y las descarboxilasas.1

En la práctica de laboratorio se trabajó con una enzima que hidroliza los carbohidratos en nuestro caso una poliasa que descompone los polisacáridos reduciéndolos a disacáridos como fue el caso de la amilasa salival.

La amilasa es la enzima que degrada el almidón y el glucógeno presente en los alimentos, actúa en los enlaces alfa que unen las glucosas. Esta enzima se encuentra presente en la saliva, donde su acción es limitada por el tiempo corto que los alimentos están en la boca.2

Imagen 1. Amilasa salival3

1,4-α-D-glucano-glucanohidrolasa; glucogenasa

La cinética enzimática estudia la velocidad de las reacciones catalizadas por enzimas, así como los factores que en ella influyen y los mecanismos por los cuales transcurren.4

La velocidad de las reacciones enzimáticas se puede medir:

- Por la cantidad de sustrato que desaparece en la unidad de tiempo.

- Por la cantidad de producto que aparece en la unidad de tiempo.

En esta práctica de laboratorio se comprobará la influencia de la concentración del sustrato (S), del enzima (E), el pH y la temperatura (T) en la cinética del enzima alfa-Amilasa salival en su acción sobre los enlaces alfa 1-4 del almidón. Para ello nos basaremos en la desaparición del almidón en la unidad de tiempo mediante el seguimiento de la reacción de color que produce el mismo, así como sus productos de hidrólisis con el Iodo.

OBJETIVOS

• Medir el efecto de la concentración de la saliva con respecto a la velocidad de reacción.

• Observar el efecto del pH y la temperatura sobre la actividad de la enzima amilasa salival.

• Medir la velocidad de reacción de la enzima con almidón mediante pruebas con yodo que indican cambios de coloración.

• Identificar el pH y la temperatura óptimos para la acción de la amilasa salival por medio de la comparación de las velocidades de reacción.

PARTE EXPERIMENTAL 5

Se prepararon las siguientes disoluciones de saliva.

Tabla1.

Dilución ml de saliva ml de agua Concentración de saliva %(V/V)

1 10 10

0.5 10 5

0.2 10 2

0.1 10 1

Se midieron las actividades de las 4 diluciones de saliva, de la siguiente manera.

1. En un tubo de ensayo se colocaron 2 ml de almidón y 2 ml de amortiguador de pH 6.8.

2. Se colocó en un tubo de ensayo 1ml de saliva de la del 10% y se vertió el contenido del tubo anterior; es decir la mezcla de almidón y amortiguador. En ese momento se inició la reacción y se tomó como tiempo cero.

3. Se sacó una gota de esta mezcla cada 20 segundos y se aplicaba en la lámina de vidrio para hacerle la prueba de yodo.

La prueba se suspendía cuando al añadir la solución de yodo, la mezcla quedaba del mismo color que la solución yodada.

Estos puntos fueron iguales para las diluciones de saliva a diferentes concentraciones.

PARTE 2. Velocidad de la reacción de la enzima con relación al pH y la temperatura.

Parte a

1. se preparó una dilución de saliva al 2 %.

2. En 4 tubos de ensayo se vertieron 2ml de suspensión de almidón y 2ml de amortiguador de pH 6.8.

3. Se vertieron en 4 tubos diferentes 1ml de la saliva al 2 %.

4. Se trabajó con cada par de tubos de ensayo; es decir, un tubo que contenía el amortiguador y la solución de almidón con el tubo de ensayo que contenía una de las muestras de saliva.

Se pusieron en diferentes medios tales como:

1 par en baño de hielo (3-5min)

1 par en baño a 37ºC (20seg)

1 par a temperatura ambiente (20seg)

1 par en baño de agua hirviendo (3-5min)

Dependiendo del tiempo especificado o según la muestra de actividad, se hacia la prueba.

Parte b. Velocidad de la Reacción Vs pH.

1. Se vertió en 5 tubos de ensayo 1ml de la saliva al 2%.

...