Acidos nucleicos practica- INTRODUCCION

INTRODUCCION

Los ácidos nucleicos son las biomoléculas portadoras de la información genética. Tienen una estructura polimérica, lineal, cuyos monómeros son los nucleótidos. El grado de polimerización puede llegar a ser altísimo, con moléculas constituidas por centenares de millones de nucleótidos en una sola estructura covalente. De la misma manera que las proteínas son polímeros lineales aperiódicos de aminoácidos, los ácidos nucleicos lo son de nucleótidos. La aperiodicidad de la secuencia de nucleótidos implica la existencia de información. De hecho, sabemos que los ácidos nucleicos constituyen el depósito de información de todas las secuencias de aminoácidos de todas las proteínas de la célula. Existe una correlación entre ambas secuencias, lo que se expresa diciendo que ácidos nucleicos y proteínas son colineares; la descripción de esta correlación es lo que llamamos Código Genético, establecido de forma que a una secuencia de tres nucleótidos en un ácido nucleico corresponde un aminoácido en una proteína.

La función de los ácidos nucleicos no se reduce, por otra parte, a contener la información necesaria para la síntesis de las proteínas celulares. Hay secuencias regulatorias que controlan la expresión de las diferentes unidades genéticas, por sí mismas o a su vez controladas por otras moléculas (hormonas, factores de crecimiento, señales químicas en general); hay asimismo ácidos nucleicos implicados en la transmisión y procesado de la información genética; hay también ácidos nucleicos con funciones catalíticas (ribosomas).

OBJETIVO

• Separar y aislar el ARN contenido en el hígado de res.
• Hidrolizar el ARN, mediante reacciones de Bial y Fiske-Subarow para la identificación de fosfatos y pentosas.

MATERIAL BIOLOGICO: 1 hígado de res (fresco, congelado).

METODOLOGIA

1. AISLAMIENTO DE ARN

• Cortar el hígado pesado previamente, en trozos pequeños, y homogeneizarlo con 50 ml de agua a no más de 15°C.
• Filtrar el homogeneizado a través de gasa en un embudo Buchner, aplicando vacío.
• Al filtrado de agregan rápidamente y sin dejar de agitar, 100 ml de fenol al 90%. Continuar agitando en el agitador mecánico durante media hora.
• Enfriar en baño de hielo y centrifugar a 3000 rpm durante 15 minutos a no más de 5°C. decantar y conservar el sobrenadante. Centrifugar nuevamente el sobrenadante enfriado en hielo por 5 minutos.
• Medir el volumen de sobrenadante recolectado después de la segunda centrifugación y agregar una décima parte de ese volumen, de acetato de potasio al 20% (pH 5).
• Agregar luego lentamente y agitando, el doble de volumen de sobrenadante, de etanol absoluto frio. Enfriar por cinco minutos en baño de hielo.
• El precipitado que se forma al agregar etanol, se recoge después de centrifugar en frio, filtrando con papel y se lava con etanol-agua (3:1), después con etanol absoluto y éter.

1. HIDROLISIS DEL ARN E IDENTIFICACION DE LOS COMPONENTES

• A 0.2 g del precipitado obtenido, se le añaden 2 ml de H2SO4 13N y se hierve agitando, durante 10 minutos.
• En el hidrolizado, efectué la reacción de Bial para identificar pentosas y la reacción de Fiske-Subarow para identificar fosfatos.
• Reacción de Fiske-Subarow a 1 ml de hidrolizado se agregan 0.5 ml de H2SO4 10N, 1 ml de molibdato de amonio al 2.5% y 1ml de reactivo de Fiske-Subarow.
• Se deja reposar 10 minutos y se anota el color producido.

RESULTADOS

Después de llevar a cabo el aislamiento del ARN y su hidrolizarían para su identificación el resultado obtenido de la muestra fue negativo.[pic 1]

[pic 2]

ANALISIS DE REULTADOS

Viendo el resultado obtenido en nuestras muestras trabajadas es posible que no se hayan conseguido un resultado positivo debido a que por falta de tiempo se disminuyó el tiempo de centrifugado de cada equipo y otro factor puede haber sido que se usó un hígado no muy fresco ya con posiblemente algunos días con lo cual se pudo haber afectado nuestra práctica.

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