Actividad enzimática de la catelocasa

Actividad enzimática de la catelocasa

Sergio Laverde - 14152026

Santiago Sánchez – 14151310

Hemberth Lopez - 14151125

1Universidad de La Salle, Facultad de Ciencias Agropecuarias, Segundo Semestre, Bioquímica, Bogotá – Colombia

Introducción: Las enzimas son proteínas capaces de facilitar y acelearar reacciones químicas de los tejidos vivos, son nombrados con la terminación “asa” a la raíz del nombre de la sustancia sobre la que actúan, no reaccionan con ellas y no deben afectar el equilibro de la reacción. 

La catecolasa es una enzima oxidorreductasa la cual cataliza la oxidación de algunos compuestos orgánicos donde usa al oxigeno como aceptor de hidrogeno, de esta manera esta oxida el catecol.

El catecol es incoloro y su oxidación se evidencia en el desarrollo sucesivo de cuatro colores que son el anaranjado, rojo, café y negro, esto se genera en las papas peladas o frutas cortadas expuestas al aire y esto sucede gracias a la presencia de esta enzima.

Objetivos:

1. Familiarizarse con las propiedades de los enzimas y observar la actividad de la catalasa.
2. Observar la reacción catalizada por catecolasa.
3. Observar e interpretar el efecto de algunos factores (pH, temperatura, cambio de la concentración) sobre la actividad de la catecolasa.

Materiales y métodos:

• MATERIALES: Se utilizó tubos de ensayo, gradilla, pinzas para tubo de ensayo, pipetas (5 ml), embudo, gasa, erlenmeyer, licuadora, hielo y papas.
• REACTIVOS: Se utilizó Catecol al 0,1%. Hidroquinona al 0.1%. fenol al 0.1%. Nitrato de Plomo al 1%. Ácido ascórbico al 1%.
• MÉTODO: EXTRACCIÓN DE LA ENZIMA Y ACCIÓN ENZIMÁTICA DE LA CATELOCASA: Se licuó  una papa sin pellejo en un vaso con agua, luego fue filtrado a través de una capa doble de gasa. Se tomaron tres tubos de ensayos y fueron rotulados, se adicionaron soluciones con agua destilada, solución catecol al 0.1% y extracto enzimático, fue mezclado y después de 5 minutos fueron observados los cambios y registrados.

ESPECIFICIDAD DEL SUSTRATO: Luego se tomaron otros tres tubos de ensayo, fueron igualmente rotulados y se adicionaron extracto enzimático, solución catecol al 0.1%, solución de fenol al 0.1%, solución de hidroquinona, fue mezclado e incubado a 37ºc. Observé a los 5 y 10 minutos y registré el cambio.

EFECTO DE LA CONCENTRACIÓN DE LA ENZIMA: En dos tubos de ensayo rotulados adicioné solución de catecol al 0.1%, extracto enzimático y agua destilada, fue mezclado e incubado a 37ºc por 25 minutos observando el cambio del color cada 5 minutos siendo mezclado cada vez. Registré los resultados.

EFECTO DEL PH Y METALES PESADOS: Tomé cuatro tubos de ensayo rotulados igualmente y adicioné agua destilada, solución catecol al 0.1%, extracto enzimático, solución Nitrato de Plomo al 0.1%, solución de ácido ascórbico y se observó el efecto del pH y del metal pesado.

EFECTO DE LA TEMPERATURA: En tres tubos de ensayo marcados adicioné 2 ml de extracto enzimático y los incubé por 8 minutos a 0ºc, 37ºc y 70ºc. Les añadí 2 ml de catecol al 0.1%, mezclé y dejé 15 minutos bajo las respectivas temperaturas, examiné los cambios de color y registré los datos.

Resultados:

ACCIÓN ENZIMÁTICA DE LA CATELOCASA: En el tubo A se agregó agua destilada y solución catecol al 0.1% y se observó sustrato pero no enzima. En el tubo B se agregó agua destilada y extracto enzimático en el que se observó enzima pero no sustrato, y en el tubo C se agregaron las 3 soluciones demostrando que se unen la enzima y el sustrato provocando un color más definido.

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