Aminoacidos Y Proteínas

UNIVERSIDAD DEL MAGDALENA

LABORATORIO DE QUÍMICA ORGANICA Y BIOQUÍMICA

PROGRAMA: Biología

Tema: Aminoacidos Y Proteínas

Docente: Magister Fernando Fontalvo Julio

OBJETIVO GENERAL: Desarrollar una práctica de laboratorio para la identificación, obtención, separación y observación de propiedades de las proteínas

Fundamento Teórico: Las proteínas son polímeros lineales que presentan diversas estructuras constituidas por cadenas de aminoácidos los cuales pueden ser de veinte tipos de aminoácidos que inciden en distintas funciones de los organismos vivos.

Muchas sustancias son de origen proteínico así, por ejemplo, las enzimas anticuerpos y hormonas presentan estructuras ordenadas secuencialmente para desempeñar funciones bioquímicas específicas, entre otras, energéticas, catalíticas, reguladoras e inmunológicas.

La variedad de las proteínas se establece desde los enlaces peptídicos que se presenta entre aminoácidos. Esos enlaces se dan porque el grupo carboxílico de un aminoácido se une al grupo amino de otro.

Un criterio básico en la clasificación de las proteínas es la solubilidad de estas. Así, por ejemplo, las ovo-albuminas, presentes en la clara de los huevos de las aves, la albúmina del suero de la sangre y la lacto albúmina de la leche son fácilmente solubles en agua destilada y en soluciones salinas diluidas. Las globulinas son solubles en soluciones salinas, pero insolubles en agua destilada. Tanto las albúminas como las globulinas pertenecen al grupo de proteínas globulares.

El nivel de complejidad de las proteínas están determinadas por las estructuras primarias, secundarias, terciarias y cuaternarias, las que a su vez dependen de las fuerzas estabilizadoras que se conforman con las hélices α, la hoja plegada β, el giro β y la forma asa. Estos tópicos sirven para ensamblar los polipéptidos.

El requerimiento de las diferentes proteínas varía de acuerdo con la presencia, combinaciones y requerimientos de los aminoácidos de especies vivas. Así, por ejemplo los organismos humanos no sintetizan ocho de los veinte aminoácidos, por eso se les llama aminoácidos esenciales, porque necesitan ingerirse en la dieta alimenticia. Las aves y los peces no sintetizan la argínina el cual es un aminoácido clave en la formación de urea, porque no poseen las enzimas que se requieren para convertir la ornitina en citrulina, sustancia precursora de este compuesto.

Algunos microorganismos sintetizan todos los aminoácidos que necesitan (igual que las plantas) y pueden crecer en un medio que contenga aminoácidos inorgánicos, incluyendo nitrógeno fijado (en forma de nitrato, o ion amonio) y glucosa; otros como la bacteria productora del ácido láctico, Leuconostoc mesenteroides, necesita 18 aminoácidos comunes para desarrollarse.

Materiales y reactivos

Gradilla con 12 tubos de ensayo

1 Beaker de 500 mL

Pipetas de 1 mL

1 Erlenmeyer

Embudos

1 Mortero

Probeta de 250 ml

Vidrio de reloj

Papel filtro

Etanol 96%

Ácido nítrico concentrado

Ácido sulfúrico 96%

Água destilada

Reactivo de Millón

Ninhidrina 0,2%

Reactivo de Biuret

HCL concentrado

Acetato de plomo

Sulfato de amonio 50%

Harina de trigo

Lenteja

Hígado

Huevo

Telas de algodón

Método:

I. OBTENCIÖN DE EXTRACTOS

Preparar un extracto de harina de trigo colocando 30 gramos de esta en un vaso de precipitado a los que se les agrega 100 ml de agua destilada. Luego de agitar durante 10 minutos se filtra a través de tela fina de algodón. El filtrado se conserva para las pruebas de proteínas.

En la preparación de extracto de lenteja, se mojan y luego se maceran los granos. Después se agregan 100 ml de agua destilada, luego se agita durante 10 minutos y filtra a través de una tela de algodón. El filtrado se conserva para pruebas de proteínas.

El extracto de hígado se prepara así: antes de llegar al laboratorio se licua un trocito de esta glándula. Después en el laboratorio se filtra a través de papel filtro. El filtrado se conserva para pruebas de proteínas.

II. PRUEBA DE BIURET

En tres tubos de ensayo introduzca: 2 ml de extracto de harina de trigo, 2 ml de extracto de lenteja y 2 m de hígado. Agregue a cada tubo 2 ml de solución de Biuret (1ml de solución de NaOH 30% y 3 - 5 gotas de CuSO4). En cada tubo debe agitarse vigorosamente el contenido y observar la coloración presentada.

III. Prueba de Ninhidrina

Depositar en tres tubos de ensayo los siguientes extractos: 2ml de harina de trigo, 2 ml de lenteja y 2 ml de hígado. Agregue 2 ml de solución de ninhidrina a cada tubo, evitando el contacto directo con esta sustancia cancerígena. En cada tubo agite y luego caliente durante 5 minutos o más; deje enfriar y observe la coloración.

IV. Prueba de Millón

Agregue 0.5 ml de reactivo de millón a tres tubos que contienen respectivamente: 2 ml de extracto de harina de trigo, 2ml de extracto de lenteja y 2 ml de extracto de hígado. Observe y compare la coloración en cada tubo.

V. OBTENCION Y SEPARACION DE PROTEINAS

EL huevo como fuente principal de proteínas se compone de yema; parte central anaranjada, rica en componentes carotenoides y la exterior, la clara cuyos constituyentes son el albuminoides, la albúmina propiamente dicha y la globulina.

Los huevos de gallina pesan un promedio de 50,0 gr., con un 73% de su peso en agua.

La clara de huevo contiene ovoalbúmina en un 70%, ovomucoides, lisozymas y avidina. La yema de huevo contiene lipo-proteínas que contienen fosfatos, entre estas las lecitinas.

Haz un orificio pequeño en la cáscara de un huevo. Separa con cuidado la clara en un vaso de precipitado. Prepara luego una solución acuosa de albúmina, agitando la clara por un tiempo y luego mezclándola con dos veces su volumen de agua.

Con la clara obtenida anteriormente, solubilizar 25 ml en una relación (1:5) con agua destilada, mezclar suavemente en una probeta de 250 ml. Evitar la formación de espuma.

Observar que la ovoalbumina se disuelve en el agua, mientras que la globulina permanece sin disolverse y sedimenta lentamente.

Separar ambas proteínas por medio de un filtro (tela de algodón).

Guarde el filtrado en tubos para posteriores ensayos. El sedimentado agregarlo

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