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Plásmidos conjugativos aislados de cepas multirresistentes de pacientes de cuatro centros de salud del área metropolitana de Caracas

Al tener una tener la persistente incógnita acerca de la presencia de plásmidos conjugativos en el organismo humano, se decidió hacer un estudio de investigación acerca del tema en cuatro centros de salud distintos para ver los resultados en cada uno. Un plásmido conjugativo es aquel que se puede transferirse de una bacteria a otra mediante la conjugación; La conjugación es un medio de transferencia de genes y recombinación de bacterias cuando hay contacto directo de célula a célula.

Cuando ocurre el proceso de conjugación se traspasan una serie de determinantes genéticos los cuales les dan a la célula hospedadora más posibilidad de subsistir delante de otro organismo unicelular. Se puede decir que los determinantes genéticos de mayor importancia son aquellos que indican factores de virulencia, así como también los relacionados a la resistencia bacteriana que es cuando una cepa bacteriana es resistente a antibióticos y biocidas con la misión de eliminarlos o controlarlos.

Una variedad de pacientes ingresados a centros de atención medica, que presentan un cuadro infeccioso son relacionados con los géneros bacterianos de Klebsella pneumoniae y Escherichia coli, Algunos de ellos adquiridos por hospitales contagiándose de otros pasientes internados en el mismo, asi como también otros que tomaron la infección en la comunidad. El programa Venezolano de Vigilancia de la Resistencia Bacteriana estuvo realizando estudios y encuestas los cuales indicaron que los porcentajes de cepas de E. coli y K. pneumoniae aumentaron en resistencia ante antibióticos para combatirlos, pero no se cuenta con las respuesta ante la incognita de esta resistencia.

Para poder empezar a realizar la investigación, se procedió a tomar cepas de E. coli y K. pneumoniae bastantes resistentes como para soportar diversos tipos de antibióticos, que habían ingresado a cuatro centros de atención médicos distintos: Centro Médico de Caracas, Hospital Vargas de Caracas, Policlínica Metropolitana y Hospital “Dr. Domingo Luciani”. Más tarde se realizo la conjugación con la técnica del Filtro agregándosele cultivos líquidos de las cepas, se observo crecimiento tanto como en las cepas receptoras, como también en las donantes, estas se mezclaron y después se coloco sobre un filtro, se procedió a incubarse por 12 horas a 37°C, se colocaron disoluciones muy diluidas con precisión y antibióticos.

Los resultados tenían como objetivo poder saber más acerca de los casos infecciosos de E. coli y K. pneumoniae en pacientes, ya sean contaminándose por hospitales o no, Como muestra se tomaron 83 cepas multirresistentes, 60 contenían E. coli y las 23 restantes de K. pneumoniae. Se pudo notar que existían plásmidos capaces de conjugarse en 25 cepas de E. coli y en 15 cepas de K. pneumoniae, conformando así un porcentaje de 67% de las cepas analizadas.

Se evaluó la capacidad de resistencia entre las cepas transconjugantes y las cepas donantes, donde se vio que estas tenían una resistencia media, las pruebas se hicieron con 13 tipos de antibióticos, las cepas tuvieron mucha mas resistencia en comparación con otros antibióticos con cefalotina, aztreonam, cloranfenicol, tetraciclina, y trimetoprim.

Los antimicrobianos son una manera eficaz para combatir una gran variedad de infecciones, cuando las bacterias toman resistencia podría ser por una acumulación de mutaciones, por adquisición de plásmidos, de transposones y integrones, los cuales portan una gran cantidad de genes de resistencia; se vuelve muchísimo más complejo el proceso de eliminar la infección que la persona padece.

En este estudio se evaluaron cepas de E. coli y K. pneumoniae multirresistentes aisladas, los resultaros mostraron un alto porcentajes de los aislados podían ser conjugativos o movilizables, así como también se pudo observar que eran podían transferir desde 3 hasta 10 determinantes para dar resistencia contra distintos tipos de antibióticos; señalando así de este modo que las personas pueden desarrollar multirresistencia hacia variadas y distintas clases de antimicrobianos, cuando se adquieren plásmidos conjugativos o movilizables

Mediante la investigación y sus resultados se pudo también recalcar que el problema ya señalado también se puede transmitir por contacto de personas, en el interior de los centros de salud o en fin en la sociedad en conjunto, lo cual alerta a los especialistas a esta situación que es bastante preocupante y así informarles a otras personas para poder prevenirlo, al igual que el uso racional de antibióticos para un mejor funcionamiento de los tratamientos.

Validación de la técnica de PCR para la detección de Escherichia coli enteroagregativa causante de diarrea de Viajero

Al haber detectado una variedad de casos del Escherichia coli enteroagregativa en turistas que visitaban países tropicales se vio la tentativa idea de realizar un estudio para ver el diagnostico de la situación de una forma más completa y especifica. Fue denominada por los expertos como “Diarrea de viajero” ya que la anomalía la cual llamo la atención de los mismos, la presentaban en su mayoría personas que venían de visita a distintos paises, Escherichia coli enteroagregativa ocurre cuando se aloja un plasmido infectado de virus necesario para la expresión de las peculiares fimbrias que codifican la adherencia agregativa, y muchas cepas expresan una citotoxina o enterotoxina. Para detectar la ECEA se han implementado diversos métodos a lo largo del tiempo, pero en este caso se quiso evaluar si era posible utilizar el método del PCR para obtener estudios más definidos acerca de los pacientes con “Diarrea Viajera”.

Para iniciar el experimento se hirvió un conjunto de bacterias en agua estéril, se coloco parte del modelo a una momentánea centrifugación se le agrego a la mezcla, conteniendo KCl, MgCl2, gelatina, entre otros materiales agregados. El proceso básicamente consistió en calentar las muestras hasta que las hebras de ADN presente en ellas se separaran, Cuando esto sucede se le integra un cebador propio de ECEA, después de haber hecho esto se procede a someter a un enfriamiento, por naturaleza las hebras tienden a unirse, Si una de las hebras puestas al principio se une con un cebador indica que el resultado

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