Analisis De Celulas

IC-50

 La prueba del IC-50 mide el efecto inhibidor de una sustancia en un proceso bioquímico. Estos ensayos se utilizan con el fin de comparar la potencia del compuesto versus el compuesto que se desea inhibir.  Según la FDA en IC 50 representa la concentración de un fármaco que se requiere para inhibir el 50% de proceso biológico de manera in Vitro. Para determinar el mismo se hace una construcción de una curva que relaciona las variables de dosis-respuesta y permite identificar los efectos de esta relación a varias concentraciones.

En un tubo de ensayo se añade la la concentración a ser estudiada. El ambiente debe tener una concentración baja para poder normalizarlos con el valor de Kd. Para determinar el valor del IC-50 se dejan competir a las concentraciones del compuesto de estudio sobre la monoamina oxidasa. Una vez se obtiene el valor de esta competencia se convierte en la constante de Ki. Estos valores se sustituyen en la ecuación de Cheng-Prusoff (ver ecuación 1) y con los resultados obtenidos se pueden analizar los datos y realizar una gráfica que relaciona los datos (ver figura ___).

Ecuación 1. IC-50 por Cheng-Prusoff

Figura__. Curva ideal del IC-50

Pruebas de Citotoxicidad

Dado que el compuesto puede comportarse de una manera teórica y de otra manera en un ambiente vivo, se realizan estudios citotóxicos a la célula. Los ensayos de citotoxicidad se utilizan en la investigación de compuestos para ayudar a predecir qué compuestos pueden tener problemas de seguridad en los seres humanos antes de su desarrollo. Por otra parte estos ensayos permiten estudiar los mecanismos de citotoxicidad como una manera de obtener una mejor comprensión de los procesos biológicos normales y anormales que controlan el crecimiento celular, la división, y la muerte.

La citotoxicidad del compuesto en la célula se determina por varios métodos, pero todos los métodos coinciden que que se debe medir la integridad de la membrana como un parámetro citotoxico. La integridad de la membrana puede ser evaluada mediante el uso de colorantes vitales como yoduro de tripano azul, por biomarcadores de la proteasa,  o mediante la medición de contenido de ATP. Una vez se obtienen los resultados de estas pruebas se pasa a determinar el porcentaje de viabilidad.

Utilizando triptisona se disocian las células y se resuspenden en el medio. Para determinar la cantidad de células necesarias se utiliza una relación entre célula y densidad. Cuando se determina las células a utilizarse se debe realizar un estriado en una placa y encubar por 24 horas a 370. A estas placas se le añade DMSO (0.2%) y se vuelve a encubar bajo las mismas condiciones. Se añade

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