Antígenos Bacterianos

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Los Antígenos Bacterianos son una técnica de aglutinación en porta y tubo para la detección y semicuantificación de anticuerpos anti- Salmonella, Brucella y Proteus en suero humano. Los reactivos, suspensiones bacterianas, coloreadas y estandarizadas, aglutinan en presencia del anticuerpo homologo correspondiente en las muestras ensayadas

Materiales

• Placa de pocillos (6x5) para prueba de antígenos bacterianos
• 2 pipetas Pasteur
• 4 aplicadores de madera
• Holder de vacutainer
• Aguja estéril (vacutainer)
• 2 Tubos para muestra con tapa roja (Sin anticoagulantes)
• Torniquete
• Torundas impregnadas en alcohol
• Cronometro
• Gradilla
• Elementos PP (guantes, bata, etc.)
• Marcador permanente
• Linterna

Equipo

• Centrifuga

Reactivos

Los reactivos que se utilizaran en esta prueba son los siguientes:

• Salmonella paratyphi AH
• Salmonella paratyphi BH
• Salmonella typhi H
• Salmonella typhi O
• Brucella abortus
• Proteus OX19
• Un solo reactivo de control

Procedimiento

Primer procedimiento (Obtención de muestra de sangre)

1. Primeramente, preparar nuestros materiales para realizar la venopunción, poniéndonos los guantes.
2. Es necesario transmitirle comodidad y profesionalismo al paciente.
3. Solicitamos que nuestro paciente tome asiento y extienda sus brazos.
4. Hacer inspección de los brazos en busca del lugar más propicio para puncionar, palpando las venas.
5. Ya seleccionado el lugar pasamos a realizar la asepsia con una torunda de algodón empapada en alcohol del 70 de manera circular de dentro hacia afuera, sin pasar por el mismo lugar.
6. Después de dos minutos que la asepsia haya hecho efecto, colocaremos el torniquete a 3-4 cm del lugar donde se realizara la punción.
7. Ahora tomamos el Holder y se le pone la aguja que debe estar sellada al momento de sacarla de la caja, ademas se pone el tubo con tapa roja sin anticoagulante de vacío dentro del Holder sin realizar presión.
8. Se destapa la aguja y se inserta dentro de la vena del paciente con el bisel mirando hacia arriba en un ángulo de 20°.
9. Ya adentro de la vena se empuja el tubo de vacío, que al clavarse empezara a succionar la sangre de la vena.
10. Una vez que la cantidad de sangre ya este llegando a la mitad del tubo, procedemos a retirar el torniquete.
11. Ya retirado el torniquete esperamos a obtener la cantidad que consideremos adecuada en nuestro tubo de ensayo, para después quitarlo del Holder.
12. Colocamos la muestra en la gradilla.
13. Retiramos la jeringa de la vena de nuestro paciente y rápidamente ejercemos presión con una torunda de algodón limpia.
14. Solicitamos al paciente que doble su codo manteniendo la torunda en presión por almenos 5 minutos.
15. Posteriormente identificamos nuestra tubo con muestra con los datos del paciente y hora de la toma.

Segundo procedimiento (Centrifugación de la muestra para conseguir suero)

1. En este caso obtuvimos dos muestras con el mismo volumen, por lo que no tuvimos la necesidad de conseguir otro tubo para equilibrar la centrifuga. Así que solo esperamos 10 minutos a que coagule.
2. Posteriormente se colocarán ambos tubos en la centrifuga, cada uno al extremo opuesto de otro.
3. Son centrifugados a 100 rpm por 5 minutos
4. Una vez que el tiempo de centrifugado haya terminado, únicamente esperamos a que la centrifuga se detenga por sí misma y sacamos nuestros tubos de muestra.
5. Si la muestra fue tomada correctamente se podrá apreciar la calidad del suero, mientras este no se encuentre hemolizado o lipémico.

Tercer procedimiento (Realización de prueba de antígenos bacterianos)

1. Primeramente, dejaremos atemperándose nuestros reactivos.
2. Mientras tanto, marcaremos nuestra placa de pocillos con el orden en el que se coloca los reactivos con bacterias inertes.
3. Ya marcada la placa correctamente se procede a tomar una pipeta Pasteur con la que tomamos un poco de suero de nuestra primer muestra.
4. Se colocan 50 ul de suero en cada pocillo.
5. Posteriormente, se realiza lo mismo con el suero de la segunda muestra.
6. Antes de colocar los reactivos de antígenos bacterianos, pondremos un único control positivo que será suficiente para confirmar que los demás reactivos se encuentran funcionando correctamente.
7. Ahora que ya se encuentran en los pocillos las gotas de muestra y control, se procede a tomar cada uno de los reactivos de antígenos bacterianos, que deben ser homogenizados suavemente antes del ensayo.
8. Se añade una gota de cada antígeno próximamente a la de suero.
9. Tomamos los palillos y procuramos mezclarlos extendiendo por toda la superficie interior del círculo.
10. Hecho esto, será necesario agitarlo manualmente de 80-100 rpm durante 1 minuto, en este caso con contar hasta 100 revoluciones bastará.
11. Inmediatamente después de las 100 vueltas se visualiza bajo abundante iluminación y de preferencia fondo blanco la presencia de precipitados que indiquen un resultado positivo.

Los resultados que obtuvimos fue Negativo en el A y positivo en el reactivo B y Proteus.

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