BIOLOGÍA Y ECOLOGÍA MICROBIANA: TÉCNICA DE TINCIÓN DE GRAM

UNIVERSIDAD AUTÓNOMA CHAPINGO[pic 1][pic 2][pic 3]

DEPARTAMENTO DE INGENIERIA AGROINDUSTRIAL

BIOLOGIA Y ECOLOGIA MICROBIANA

PRACTICA # 3

TÉCNICA DE TINCIÓN DE GRAM

PROFESOR

DR. GABRIEL LEYVA RUELAS

Grado: 5º     Grupo 03      EQUIPO No

Integrantes:

• CRUZ FRANCISCO RAFAEL
• FELIX ARREDONDO JUAN MANUEL
• MIRANDA LENDESMA ANA KAREN
• PADILLA PÉREZ BRAULIA
• POLO FLORES ISMAEL

                                                           CHAPINGO, EDO. DE MÉXICO A 25 DE AGOSTO DE 2015

INTRODUCCIÓN

A diferencia de las tinciones simples, las tinciones diferenciales reaccionan de modo diferente con las distintas clases de bacterias y por lo tanto pueden ser empleadas para establecer  una distinta clase entre ellas. Las tinciones diferenciales utilizadas con mas frecuencia para las bacterias son la tinción de Gram. (Burrows y Schuhardt 1989)

Tinción de Gram

La tinción de Gram fue desarrollada por el bacteriólogico danés Hans Christian Gram en 1884 y es uno de los metodos de tinción mas utiles por que permite clasificar a las bacterias en dos grupos: las bacterias grampositivas son las que retienen la la tinción primaria y aparecen en un color violeta oscuro; las bacterias gramnegativas son las que quedan decolaradas y se tiñen ligeramente por el constraste, rosa en el caso de la safarina.

La reacción grampositiva es relativamente rara en biologia; aparece solo entre bacterias, levaduras y hongos filamentosos. Muy pocas estructuras biologicas son grampositivas.(Tortota et al 2007).

Se han propuesto muchas teorias para explicar el mecanismo de la reacción de coloración de Gram; pueden dividirse en dos categorias principales. Las suposiciones correspondientes al primer grupo asumen un mecanismo quimico con un sustrato de la tinción de Gram, especifico de bacterias grampositivas. En el segundo grupo se propone la existencia de una diferencia de permeabilidad entre las bacterias grampositivas y gramnegativas.

Todas las evidencias apoyan la segunda de estas teorias, que esta basada en la estructura y composicion de la pared celular bacteriana. Cuando la pared bacteriana se tiñe con el complejo cristal violeta-yodo, este complejo queda atrapado dentro de los complejos grampositivos y no puede ser retirado facilmente por un solvente alcohólico, debido a la naturaleza fisicoquimica de sus paredes celulares; sin embargo la pared celular de las bacterias gramnegativas permite eliminar el complejo colorante-yodo por tratamiento con alcohol, la separación es facilitada por el mayor contenido de lipidos de las paredes celulares gramnegativas.(Tortota et al 2007).

OBJETIVOS

• Observar la morfologia y el tipo de agrupación
• Diferenciar bacterias Gram(+) de Gram(-)

MATERIALES Y REACTIVOS

• Cofia y cubrebocas
• Asa bacteriologica
• Mechero de Bunsen
• Gradilla
• Encendedor
• Microscopio compuesto
• Cloro
• Alcohol
• Cristal violeta
• Yodo(Gram)
• Alcohol-acetona
• Safranina de Gram
• Aceite de inmersión
• Cultivo microbiano
• a) Bacillus subtilis
• b) Escherichia coli

METODOLOGIA

1. Preparar el frotis
2. Colocar en el portaobjetos una gota de agua, luego esterilizar el asa bacterialogica para posteriormente tomar una pequeña muestra del cultivo microbiano y colocarlo sobre la gota de agua del portaobjetos, dispersarlo aproximadamente 1m2  con la intension de que las bacterias no queden encimadas. Secar la muestra con el calor de los mecheros( a todo el proceso anterior se le conoce como frotis)
3. Cubrir la muestra con cristal violeta durante un minuto
4. Lavar y secar al aire libre
5. Agregar la solución de yodo de Gram o lugol de Gram / 1 minuto
6. Repetir el paso 3
7. Aplicar una mezcla de alcohol-acetona y dejar actuar de 10 a 20 segundos
8. Repetir paso 3
9. Por ultimo adicionar safranina de Gram durante dos minutos maximo
10. Repetir paso 3
11. Observar en el microscopio

RESULTADOS

ANALISIS DE RESULTADOS

Con base a  los resultados obtenidos se puede  decir que existe una gran diferencia entre estas dos bacterias.

Cada uno de los colorantes que se utilizó en esta práctica tiene tienen una función característica: el cristal violeta(colorante básico azul) tiñe a los microorganismos de azul, el yodo es un fijador de color,  este se adhiere dentro del complejo, el alcohol-acetona (un solvente para decolorar la preparacióm) decolora a las Gram (-). Por último la safranina (colorante básico, fijador de color rojo) tiñe a las gram (-) de rojo. Obserbandose así los dos grupos; Gram (+) y las Gram (-).

...