Bacterias

PRACTICA # 3

Observación microscópica de bacterias:

Coloración simple y coloración diferencial.

I. Objetivos.

 Proveer los fundamentos de las técnicas de coloración para bacterias.

 El alumno identificará las principales formas bacterianas.

II. Introducción.

Debido a que la gran mayoría de bacterias son muy pequeñas e incoloras, una forma de poder observarlas es empleando el microscopio óptico y sustancias colorantes que serán aplicadas según la técnica.

Para realizar una coloración, primero se realiza un frotis que consiste en “sujetar” las bacterias contenidas en la muestra posteriormente se adicionarán los colorantes respectivos; si se realiza una coloración simple, solo se requiere de un colorante, a diferencia de una coloración diferencial la cual es más compleja y requiere del uso de más de un colorante y permite contrastar a las bacterias respecto a su medio.

La Coloración Gram, es una de las más conocidas e importantes como criterio de clasificación de las bacterias, se basa en el empleo de un colorante primario, cristal violeta, decolorante y un colorante secundario, safranina. Además se dispone de técnicas para teñir y observar estructuras bacterianas como la endospora, la cápsula, flagelo.

Finalmente es importante mencionar que lograr la identificación del género y especie de las bacterias es un proceso en el que se requiere realizar pruebas, serológicas, etc.; el empleo del microscopio óptico es un apoyo importante pero no definitivo.

III. Equipos, instrumentos e insumos

Para coloración diferencial

 Plumón indeleble

 Vaso de precipitado

 Mechero

 Asa de siembra

 Láminas porta objetos

 Cristal violeta, lugol, alcohol, safranina

 Tinta china

 Aceite de inmersión

 Microscopio binocular

 Cultivos bacterianos

Para coloración simple

 Plumón indeleble

 Vaso de precipitado

 Mechero

 Asa de siembra

 Láminas porta objetos

 Cristal violeta o Azul de Metileno

 Microscopio binocular

 Cultivos bacterianos

IV. Procedimiento.

Coloración simple:

Rotular los portaobjetos

En condiciones de esterilidad tomar una pequeña muestra y realizar el extendido en la lámina portaobjetos.

Fijar el frotis con alcohol o al aire, según corresponda.

Cubrir el frotis con 2 gotas e cristal violeta por 1 minuto

Eliminar el exceso de colorante con agua destilada.

Dejar secar.

Observar al microscopio óptico, usar correctamente el equipo para evitar daño de los lentes.

En caso de que sea

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