Biologia.

BIOLOGIA

• DOCENTE:

FERNÁNDEZ REFORME BLANCA

• TEMA:

ETAPAS DE LA TECNICA DEL PCR

• ALUMNA:

VALVERDE CASTRO FERGIE

• CARRERA:

ODONTOLOGIA

• CICLO: I

-2014-

LAS ETAPAS DE LA TECNICA DEL PCR

Etapas de la PCR:

1- Desnaturalización del ADN doble cadena.

2- Hibridación de los iniciadores a la zona 3´ específica de cada una de las hebras.

3- Extensión del cebador por actuación de la DNA polimerasa.

Para que el proceso se lleve a cabo en el tubo de reacción debemos encontrar:

a- ADN objetivo (el que se quiere amplificar)

b- ADN Polimerasa

c- Deoxinucleótidos

d- Primers o iniciadores

Para replicar el ADN, la técnica PCR hizo uso, en un principio, de la ADN polimerasa de la bacteria Escherichia coli. Pero esta enzima resulta desactivada debido a la alta temperatura requerida para desnaturalizarla doble cadena del ADN, por lo cual debía agregarse enzima fresca al comenzar el tercer paso de cada ciclo. Este inconveniente fue solucionado de manera ingeniosa cuando se la reemplazó por su equivalente de la bacteria "termófila" Thermusaquaticus. En efecto, la ADN polimerasa de este microrganismo, denominada Taq polimerasa, actúa eficientemente entre los 75° C y los 80° C y resiste más de dos horas a 93° C. De esta manera es posible mezclar todos los componentes de la PCR al comenzar el primer ciclo y la reacción en cadena puede llevarse a cabo mediante equipos automatizados que realizarán los ciclos térmicos programados. Es importante aclarar que los primers no deben ser complementarios entre sí para evitar la propia replicación.

En la primera etapa (desnaturalización) la doble hélice de ADN se separa en dos hebras. Para ello se realiza una incubación de la muestra a altas temperaturas (93-97ºC). La re naturalización producirá cuando la temperatura disminuya.

En el segundo paso (hibridación) los cebadores se unen a las zonas 3´ complementarias que flanquean el fragmento que queremos amplificar. Se realiza gracias a la bajada de la temperatura (50-65º C)

En la tercera etapa (elongación) se produce la síntesis de una cadena sencilla (produciéndose un fragmento de doble cadena por la complementariedad) en la dirección 5´-> 3´ mediante la enzima DNA polimerasa, la cual incorpora los deoxinucleótidos fosfato presentes en el medio siguiendo la cadena molde.

REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS:

• Fundamentos de la Biotecnología Genómica

Reyes-López, Miguel Ángel Hernández-Mendoza, José Luis Mayek-Pérez, Netzahualcóyotl

Páginas: 278

Editorial: Plaza y Valdés, S.A. de C.V.

Ubicación: México

Fecha de publicación: 2010

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