CONTEO DE ESPORAS EN CAMARA DE NEUBAUER. INTRODUCCION

UNIVERSIDAD TECNOLOGICA BILINGÜE DE MINERAL DE LA REFORMA.

4rd CUATRIMESTRE.

TSU: AGROBIOTECNOLOGIA.

PROFESOR: LUIS GONZALEZ DE LA ROSA.

PRACTICA 1

CONTEO DE ESPORAS EN CAMARA DE NEUBAUER.

KAREN GUTIERREZ GUZMAN.

INTRODUCCION

La cámara de neubauer es un aparato de precisión hecho de vidrio óptico especial. Se utiliza para contar células u otras partículas en suspensiones bajo el microscopio. Las cámaras de recuento se utilizan principalmente para el análisis de sangre (recuento de leucocitos, eritrocitos, trombocitos) y recuento de células en el líquido. Además las cámaras de recuento sirven para contar bacterias, esperma y esporas de hongo.

Se trata de una gruesa placa de cristal con forma de portaobjetos, de unos 30 x 70 mm y unos 4 mm de grosor. En una cámara simple, la porción central, que es donde se realiza el conteo, está dividida en 3 partes

En la parte central se encuentra grabada una retícula cuadrangular. En el caso de cámara doble, que son las más comunes, existen 2 zonas de conteo, una superior y otra inferior al eje longitudinal de la cámara.

La retícula completa mide 3 mm x 3 mm de lado. Subdividida a su vez en 9 cuadrados de 1mm de lado cada uno.

METODOLOGIA

Material

• Mechero
• Vaso de precipitado 250 mL
• Vaso de precipitado 600 mL
• Gradilla
• Tubos de ensaye 22*175 mm con tapa
• Pipeta graduada
• Asa bacteriológica
• Propipeta
• Espátula
• Matraces Erlenmeyer 250 mL
• Caja Petri
• Cámara de neubauer
• Agitador magnético
• Probeta 100 mL
• Piceta

Reactivos

• Agar papa dextrosa
• Tween 20
• Agua destilada

Equipo

• Parilla eléctrica
• Microscopio óptico
• Autoclave
• Balanza analítica

METODOLOGIA

1. Preparación de la solución de Tween 20 al 0.01%.

En un matraz Erlenmeyer de 250 mL, se diluyo 10L de Tween 20 en 100 mL de agua destilada y se esterilizo bajo las mismas condiciones.[pic 2]

2. Cosecha de esporas.

1. Una vez esporulado el hongo, es necesario separar las esporas de las estructuras que la producen, en este caso de los conidióforos. Para tal efecto separar las esporas por agitación magnética agregando 10L de Tween 20 al 0.01% estéril y un agitador magnético estéril dentro del matraz.[pic 3]

2. Una vez separadas, cosechar las esporas y vaciarlas en tubos con tapón de rosca estériles de 15 mL y conservar a 4°C.

3. Recuento en cámara de Neubauer.

1. Se realizó una dilución de 1/20 en agua destilada.

2. De la dilución anterior, se tomó una muestra de 10L y se depositó en el área de conteo de la cámara de Neubauer.[pic 4]

3. Para el recuentro: se utilizó una micropipeta, se colocó una gota de del cultivo o suspensión de la muestra de 10L en el área hundida y un cubreobjetos que debe reposar en los bordes de la superficie alta de la placa de vidrio. Es importante hacer notar que no deben quedar burbujas entre el porta y el cubreobjetos. Se contabilizan únicamente las esporas que se encuentran en los extremos y en el centro del total de la cuadricula.[pic 5]

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