Ciencia Humana

UNIVERSIDAD VERACRUZANA

UNIDAD DE CIENCIAS DE LA SALUD

FACULTAD DE BIOANALISIS

LICENCIATURA EN QUIMICA CLINICA

M. en C. Rosa Estela Sandoval Pérez

Inmunohematologia

Compilador: Efraín Lozano Carmona

Xalapa, Ver a 28 de abril de 2011

MANUAL DE LABORATORIO DE INMUNOHEMATOLOGIA

INDICE

PRACTICA #14

CUANTIFICACION DE HEMOGLOBINA

OBJETIVO

 Determinar la concentración de hemoglobina en sangre por el método de cianometahemoglobina.

INTRODUCCION

FUNDAMENTO

En este método la hemoglobina reacciona con el ferrocianuro de potasio formando cianomnetahemoglobina. La densidad óptica de este pigmento es medida a 540nm comparada con un patrón conocido.

MATERIAL

Gradilla

1 pipeta graduada de 5ml

1 pipeta Sahli con boquilla

2 tubos de ensaye 13x100

Papel parafil

Espectrofotómetro filtro 540nm

Solución de cianometahemoglobina (Drabkin)

Solución patrón de hemoglobina de 60mg/dl

Sangre problema con anticoagulante

PROCEDIMIENTO

1. Colocar en un tubo de ensaye de 13x100 5 ml de solución Drabkin.

2. Con una pipeta de Sahli agregar 0.02ml de sangre problema.

3. Tapar el tubo con papel parafil mezclarlo por inversión y dejarlo reposar por 10min.

4. Leer la absorbancia a 540nm ajustando a 100% con blanco de cianometa.

5. Convertir el porcentaje de absorbancia en gramos de hemoglobina por decilitro usando la solución patrón para obtener el factor de calibración.

Concentración del estándar

Factor de calibración =

Absorbancia

Concentracion de Hb= absorbancia Pb x factor

RESULTADOS

Se anexa una curva de calibracion

VALORES DE REFERENCIA

Hombres 14.0-18.0 gr/100ml

Mujeres 13.5-16.0 gr/100ml

INTERPRETACION CLINICA

BIBLIOGRAFIA CITADA

PRACTICA #15

DETERMINACION DE HEMATOCRITO

OBJETIVO

 Determinar el volumen de hematocrito en sangre por el método de microhematocrito.

INTRODUCCION

FUNDAMENTO

El volumen globular o el volumen de hematocrito, es el porcentaje de células rojas en relación a la cantidad total de sangre.

MATERIAL

Gradilla

Tubos capilares

Lector de hematocrito

Micro centrifuga

Mechero Bunsen

Sangre problema con anticoagulante

PROCEDIMIENTO

1. Llenar las dos 2/3 partes del tubo capilar con la sangre problema (mezclar por inversión).

2. Sellar el capilar por el extremo opuesto con la flama del mechero rotándolo para que el sellado sea uniforme.

3. Centrifugar de 5 a 8 minutos a 12000 rpm

4. Tomar la lectura con el lector de hematocrito. En caso de no contar con un lector utilizar una regla mediante las alturas de volumen de eritrocitos y de volumen total de la muestra de la siguiente forma:

Hematocrito: Altura de eritrocitos x 100

altura del volumen

VALORES NORMALES

Hombres 50-55 ml%

Mujeres 42-48 ml%

Recién nacidos 44-54 ml%

Niños de 1 año 35 ml%

Niños de 10 años 37.5 ml%

RESULTADOS

Regla de 3:

44 ---------------------100 x= 36.3636%

16 ---------------------x

INTERPRETACION CLINICA

BIBLIOGRAFIA CITADA

PRACTICA #16

DETECCION DE ANTICUERPOS NO TREPONEMICOS (RPR)

OBJETIVO

INTRODUCCION

FUNDAMENTO

MATERIAL

Gradilla

4 tubos de ensaye 12x75

1 pipeta Pasteur con bulbo

3 pipetas graduadas de 1ml (1/10)

1 pipeta de 0.1ml (0.01/0.1)

Solución salina fisiológica

Rotador mecanico

Suero problema

Reactivos: Suspensión de antígeno RPR

Control positivo RPR

Control negativo RPR

PROCEDIMIENTO

Preparacion del antígeno:

La suspensión del antígeno esta lista para usarse. Debe agitarse por 5 a 10 segundos antes de utilizarse para resuspender las partículas de carbón.

I.- PRUEBA CUALITATIVA

1. Poner a temperatura ambiente la suspensión del antígeno RPR y los controles.

2. Colocar una gota de suero sobre un circulo de la tarjeta de prueba. Extender la muestra, cubrir el total de la superficie del circulo.

3. Agitar el frasco de la suspensión del antigeno antes de utilizarlo. Sostenerlo en posision vertical y dispensar una gota de esta suspensión sobre la muestra de suero.

4. Colocar la tarjeta de prueba en un rotador y agitar por 8 minutos a 100 rpm.

5. Retirar la tarjeta del rotador, agitar brevemente. Leer macroscópicamente.

II.- PRUEBA CUANTITATIVA

1. Colocar en una gradilla 4 tubos de 12x75 y numerarlos.

2. Agregar a cada uno de ellos 0.5ml de solución salina.

3. Depositar 0.5ml de suero problema en el tubo #1 y mezclarlo.

4. Pasar 0.5ml del tubo #1 al tubo 2 y mezclar. Continuar esta operación hasta el tubo #4.

5. Depositar 0.05ml de cada una de las diluciones sobre los anillos diferentes de la tarjeta de reacción. Extender sobre el total de la superficie de cada circulo donde se

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