Contagem global de leucócitos na câmara de Neubauer e Contagem diferencial de leucócitos

INTITUTO FEDERAL DO ESPÍRITO SANTO

CURSO TÉCNICO EM BIOTECNOLOGIA

TÉCNICAS DE ANÁLISE EM SAÚDE II

PROFª. MARCELLA PORTO

Assunto: Contagem global de leucócitos na câmara de Neubauer e Contagem diferencial de leucócitos

Componentes: Giliaria Andrizen, Letícia de Andrade e Marcella Machado

Introdução

Objetivo

Realizar contagem global de leucócitos na câmara de Neubauer e Contagem diferencial de leucócitos, para avaliar o quadro leucocitário de amostra de sangue e interpretar os resultados obtidos de acordo com supostas alterações das células.

Materiais e Métodos

Utilizaram-se nesta prática amostra de sangue coletado com EDTA; Câmara de Neubauer e lamínula; micropipetas de 100 e 1000 µL e ponteiras; tubos de ensaio; microscópio e; líquido de Turk.

Solução diluidora (Turk)

Ácido Acético Glacial – 2,0 mL

Azul de Metileno – 1,0 mL

Água Destilada q.s.p – 100 mL

Necessário filtrar antes do uso.

Procedimento Experimental

Primeiramente, pipetaram-se 380 μl do líquido de Turk no tubo de ensaio. Em seguida, pipetaram-se 20 μl de sangue total e limpou-se a ponteira com papel de filtro. Após, transferiram-se os 20 μl de sangue para o tubo com o líquido de Turk e lavou-se com ele o interior da pipeta por aspiração e expulsão do líquido. Realizou-se diluição de 1:20. Logo após, agitou-se suavemente por dois minutos e encheu-se o retículo da câmara de contagem (Neubauer), evitando-se excesso de liquido e bolhas de ar sob a lamínula. Deixou-se repousar por dois minutos para a sedimentação dos glóbulos. Depois, focalizou-se a preparação com pequeno aumento no microscópio para localizar-se o reticulo e observou-se a distribuição uniforme dos leucócitos. Em seguida, observou-se com aumento de 400x e fez-se a contagem de todos os leucócitos encontrados no quadro marcado em L.

Com a mesma diluição que se realizou a contagem na câmara de Neubauer, realizou-se uma extensão sanguínea e utilizou-se a técnica de coloração Panótico.

Confecção da Extensão Sanguínea:

Limparam-se as lâminas, certificando-se de que todas estavam desengorduradas, nomearam-nas com lápis, colocou-se uma gota de sangue sobre cada lâmina e à frente da gota posicionou-se uma lâmina extensora de vidro sem arestas, esperou-se que se formasse um filme do sangue, fez-se um movimento para trás e rapidamente, com a lâmina extensora inclinada, a um ângulo médio de 45ºC, distendeu-a, num movimento de “empurre” para frente, até o fim da lâmina. Identificaram-se as lâminas, deixaram-nas secar e deu-se início à coloração.

Coloração Hematológica: Técnica de Coloração: Panótico

Com o esfregaço já seco, imergiu-se a lâmina no Fixador ou Solução 1 por 10 segundos. Retirou-se a lâmina do Fixador, apoiou o excesso em papel toalha e em seguida, imergiu-se a lâmina no Revelador ou Solução 2 por mais 10 segundos. Retirou-se do Revelador, tornou-se a apoiar o excesso no papel toalha e colocou-se no Corante ou Solução 3, novamente por 10 segundos. Após esse tempo, lavou-se a lâmina em água corrente num fluxo suave, evitando-se jatos fortes e em seguida secou-a à temperatura ambiente.

Posteriormente ao processo de coloração, com a lâmina corada e já seca, levou-a para análise microscópica, na objetiva de imersão, e fez-se a contagem diferencial dos leucócitos identificando cada célula. Para isso, contou-se 100 leucócitos e calculou-se a percentagem de cada uma das células. Por fim, anotaram-se os resultados obtidos, apresentados no tópico abaixo.

Resultados e Discussão

Parte A: Contagem Global dos Leucócitos em Câmara de Neubauer

Cálculo:

Número de Leucócitos/mm3 ou µL = Nº de células contadas / 4 (número total de quadrantes contados) x Fator de correção da câmara x Fator de diluição

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