"Cromatografía" Purificación de Biomoléculas

Introducción

A comienzos del año 1903, Mijail Tsweet usó columnas de adsorción de líquidos para separar pigmentos vegetales (por ejemplo, clorofilas). Las disoluciones se hacían pasar a través de una columna de vidrio rellena de carbonato de calcio, que finamente dividido de un material poroso que interacciona de forma diferente con los componentes de la mezcla, de forma que éstos se separaban en distintas bandas coloreadas a lo largo de la columna. El botánico ruso Mijaíl Tsweet empleó por primera vez en 1906 el término "cromatografía" (que significan respectivamente chroma "color" y graphos "escribir").

La cromatografía es una técnica que permite la separación de los componentes de una mezcla debido a la influencia de dos efectos contrapuestos.

a) Retención. Efecto producido sobre los componentes de la mezcla por una fase estacionaria, que puede ser un sólido o un líquido anclado a un soporte sólido.

b) Desplazamiento. Efecto ejercido sobre los componentes de la mezcla por una fase móvil, que puede ser un líquido o un gas.

El fenómeno de migración de los componentes de una mezcla a lo largo de la fase estacionaria, impulsados por la fase móvil, recibe el nombre de elución. La mezcla a separar se deposita sobre la fase estacionaría, mientras que la móvil atraviesa el sistema desplazando a los componentes de la mezcla a distinta velocidad, dependiendo de la magnitud de sus interacciones relativas con ambas fases. Las dos fases se eligen de forma que los componentes de la muestra se distribuyan de modo distinto entre la fase móvil y la fase estacionaria. Aquellos componentes que son fuertemente retenidos por la fase estacionaria se mueven lentamente con el flujo de la fase móvil; por el contrario los componentes que se unen débilmente a la fase estacionaria, se mueven con rapidez. Como consecuencia de la distinta movilidad, los componentes de la muestra se separan en bandas o zonas discretas que pueden analizarse cualitativa y/o cuantitativamente

Cromatógrafo. El instrumento empleado para realizar una separación cromatográfica.

Objetivos

 Clasificar las sustancias con base en sus propiedades físicas y químicas para caracterizarlas como mezclas, compuestos y elementos químicos.

 Demostrar la técnica de cromatografía para separar los componentes de una tinta comercial.

En el presente laboratorio se aplicará esta técnica para demostrar la forma en que se separan los pigmentos utilizados en una tinta comercial.

Reactivos

Mezcla de disolventes (eluente): etanol, 1-butanol y amoniaco (1:3:1)

Materiales

 Una tira de papel poroso.

 Marcadores permanentes de distintos colores (negros, azul, rojo y verde).

 Un vaso plástico transparente.

 Cinta adhesiva.

 Tijeras.

 Regla.

 Lápiz

Procedimiento

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