Cuantificacion De Acidos Grasos

Principio: Los ácidos grasos de la margarina son esterificados en presencia del catalizador trifluoruro de boro (BF3).

Antes del análisis de cromatografía de gases (GC), la muestras son pre tratadas de la siguiente forma:

1. Calentar 10 gramos de la muestra en la estufa hasta la separación de fases.

2. Centrifugar por 3500rpm durante 5 minutos.

3. Recuperar la fase grasa en un vial con 2 gramos de sulfato de sodio anhidro para remover la humedad remanente.

Posteriormente se utiliza el método 2.301 de la IUPAC (IUPAC, 1979ª) para obtener ésteres de metilo de ácidos grasos, el cual consiste en:

1. Colocar en un matraz balón de 100mL la cantidad de 350 gramos de la fase grasa.

2. Adicionar al matraz 6mL de solución metanólica de NaOH 0,5N y se pone a reflujar durante 5 minutos.

3. Se adicionan 3mL de BF3 en metanol al 14% a través de la boca del refigerante continuando el reflujo por otros 2 minutos.

4. Se añaden 1,5mL de diclorometano reflujando 1 minuto más.

5. Se enfría el sistema de reflujo, se desmonta y se agrega al matraz 10mL de solución saturada de NaCl haciendo rotar el matraz.

6. Se extrae la capa de diclorometano en un embudo de separación y se recupera en un tubo Eppendorf con sulfato de sodio anhidro, donde se agita vigorosamente.

7. Se lleva el diclorometano a 0,5mL y se centrifuga durante 5 minutos a 13000rpm en una microcentrífuga.

8. Se decanta el disolvente para colocarlo en un vial ámbar de 2mL.

El diclorometano contiene los ésteres de metilo de ácidos grasos (FAME, por sus siglas en inglés) presentes en la muestra, éste se analizará posteriormente en el análisis de cromatografía de gases.

PROCEDIMIENTO DE CROMATOGRAFÍA DE GASES CAPILAR

Principio: El método se utiliza para determinar la composición y concentración de ácidos grasos esenciales de grasas y aceites vegetales hidrogenados (total o parcialmente)y no hidrogenados por cromatografía de gases capilar.

Los FAME se analizarán usando el cromatógrafo de gases Clarus 500 marca Perkin-Elmer con detector de ionización de flama (FID) y una columna capilar RtxR 2330 (105m x 0,25mm ID, 0,2µm film) marca Restek.

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