Cultivos a gran escala
Enviado por Robles Gutiérrez Kevin Gabriel • 6 de Junio de 2024 • Tarea • 411 Palabras (2 Páginas) • 69 Visitas
Met2. Cultivos a gran escala
Los cultivos de alta densidad celular fueron hechos en un biorreactor D650 con una capacidad de 650L y un valor d/D de 0.375. Este contaba con sensores para la medición de oxígeno disuelto, temperatura, pH, espuma y densidad óptica. La espuma fue controlada con un destructor mecánico de espuma y un agente antiespumante. El oxígeno disuelto se mantenía entre 20 y 30% ajustando manualmente el flujo de aire entre 100 y 600 L/min. El pH fue ajustado a 6.9 con una solución de NH4OH 25% (p/vol) o ácido actánico puro. La temperatura se mantuvo en 30°C. Se introdujo un inóculo de 1 a 2% (vol/vol) precultivado por 18 a 36h a 30°C.
El biorreactor era alimentado con dos soluciones separadas: octanato de amonio 3M y mgso4-7H2O 1M. Las células se dejaron crecer durante 4 a 5 horas, el pH empezó a descender y se identificaron 3 etapas
- 6 a 7 después de la inoculación se alimentó el biorreactor con octanato de amonio 0.5mM y sulfato de magnesio 0.05mM por 5 horas consecutivas.
- La alimentación cambió a octanato de amonio 5mM y sulfato de magnesio 0.5mM por hora durante 5 horas.
- 1.8 mM y 0.27mM de octanato de amonio y sulfato de magnesio por hora hasta finalizar el periodo de cultivo.
Met4. Determinación de materia celular seca
El crecimiento de la cepa fue medida densidad óptica a 600nm y el peso de las células secas se determinó por gravimetría, centrifugadas y se liofilizaron hasta mantener peso constante.
Met 6. Extracción de PHO a pequeña escala
- Extracción con cloroformo
- Detergentes como SDS, ayudaron a formar polvo que fue resuspendido y filtrado.
- Extracción fría utilizando acetona.
Met8.Presipitacion de PHO a gran escala
La mezcla de etanol absoluto (96% vol/vol), metanol absoluto (97% vol/vol) y agua ofrece una alta purificación del polímero. La purificación del polímero seco fue determinado por cromatografía de gases y fue comparado con un estándar de PHO.
Met9. Determinación de contenido y composición de PHO
Fue determinado por metanolisis
Res2. Extracción de PHO a pequeña y gran escala
- La extracción con cloroformo ofreció un contenido de PHO de alrededor de 61%.
- El SDS solo obtuvo alrededor de 41.5%
- El método de la acetona mostró un contenido de PHo de alrededor de 93.5%
Res3. Recuperación de PHO a gran escala
El método utilizado la mezcla de alcoholes utilizada no resulta conveniente para aplicación industrial.
Se observó que el PHO estaba constituido en un 96% por 3-hidroxioctanoato, 2.8% de 3-hidroxihexanoato y 0.9% de 3-hidroxidecanoato.
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