DE ANÁLISIS DETETERMINACION DE PROTEINAS POR EL METODO DE LOWRY

INSTITUTO POLITÉCNICO NACIONAL

ESCUELA NACIONAL DE CIENCIAS BIOLÓGICAS

DE ANÁLISIS

DETETERMINACION DE PROTEINAS POR EL METODO DE LOWRY

Molina Pérez Dania Alejandra

4IV1

SECCIÓN 4

INTRODUCCIÓN

El método de Lowry es una técnica colorimétrica que permite calcular la concentración de proteínas totales presentes en una disolución o extracto biológico. El método se basa en el empleo de dos reactivos. El componente fundamental del Reactivo A es el CuSO4, que aporta iones Cu2+. En medio alcalino, estos iones reaccionan con aquellas moléculas que tengan varios enlaces peptídicos consecutivos, es decir, péptidos y proteínas, dando lugar a complejos solubles que presentan un color azul pálido. El Reactivo B, también conocido como reactivo de Folin-Ciocalteau o reactivo de fenoles, reacciona con aquellos aminoácidos de la proteína que lleven en su cadena lateral grupos fenólicos (la tirosina, la fenilalanina y el triptófano), dando lugar a un color azul intenso.

La intensidad del color producido en el tubo de ensayo, que se mide con un espectrofotómetro, es directamente proporcional a la cantidad de proteína presente en la disolución, lo que permite cuantificar ésta si se compara con tubos preparados de forma similar con cantidades conocidas de una proteína de referencia, con los que se hace una recta de calibrado

.

BIBLIOGRAFÍA O.H. Lowry, N.J. Rosebrough, A.L. Farr y R.J. Randall. J. Biol. Chem.

193: 265-275 (1951)

OBJETIVO:

Determinar la concentración de proteínas de una muestra, a través del método de Lowry, utilizando el Folín-Ciocalteau que es reducido por los complejos de coordinación que forman las proteínas con el cobre a través de enlaces peptídicos, que da una coloración azul, que puede ser cuantificada espectrofotométricamente siendo proporcional a la concentración de proteínas.

RESULTADOS

Curva de calibración para hemoglobina

En la siguiente tabla se muestran las absorbancias obtenidas al medir los tubos con la cantidad de proteína en µg, así como la respectiva grafica con el cálculo de la ecuación de la recta y el coeficiente de relación.

Tubo Cantidad de proteína g A_590 Promedio A_590

1 25 0.071 0.050

0.0605

2 50 0.040 0.048 0.044

3 75 0.076 0.084 0.080

4 100 0.094 0.102 0.098

5 125 0.091 0.106 0.0985

Regresión lineal:

Al descartar el punto dos de nuestra gráfica, la regresión lineal que se obtiene es la siguiente:

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