DETERMINACIÓN DE LÍPIDOS, AMINOÁCIDOS Y CARBOHIDRATOS

PRÁCTICA 6.

DETERMINACIÓN DE LÍPIDOS, AMINOÁCIDOS Y CARBOHIDRATOS

OBJETIVOS.

1. Distinguir entre substancias lipídicas y no lipídicas usando la prueba de Sudán IV.

2. Distinguir la presencia de aminoácidos libres en una solución mediante su habilidad para reaccionar con el reactivo de ninhidrina.

3. Identificar azúcares reductores usando Reactivo de Benedict.

4. Identificar polisacáridos usando Lugol.

INTRODUCCIÓN.

La palabra lípido se refiere a los miembros de un grupo heterogéneo de moléculas orgánicas que son solubles en solventes no polares tales como cloroformo, pero insolubles en agua. Aunque los lípidos incluyen grasas, esteroides y fosfolípidos, en esta práctica buscaremos principalmente grasas.

Los triglicéridos, un tema popular de discusión sobre las dietas, son la forma más común de grasas. Consisten en tres ácidos grasos unidas a una molécula de glicerol. Los triglicéridos se encuentran predominantemente en tejido adiposo y almacenan más energía por gramo que cualquier otro tipo de compuesto.

A temperatura ambiente, algunos lípidos son sólidos (generalmente estos se encuentran en animales) y nos referimos a ellos como grasas, mientras que otros son líquidos (generalmente aquellos encontrados en plantas) y nos referimos a ellos como aceites. El aceite vegetal, una grasa líquida, es una mezcla de triglicéridos.

Puesto que tanto los sólidos como los líquidos son no polares, determinaremos su presencia usando Sudán IV, un colorante no polar que se disuelve en sustancias no polares como tales como grasas y aceites, pero no en sustancias polares como el agua.

Las proteínas están formadas de uno o más polipéptidos, los cuales son cadenas lineales de pequeñas moléculas llamadas aminoácidos. Los aminoácidos deben su nombre al grupo carboxilo y al grupo amino que poseen. Los polipéptidos se forman cuando los aminoácidos son unidos mediante enlaces peptídicos entre el grupo amino de un aminoácido y el grupo carboxilo de otro.

Una de las maneras más sencillas de detectar la presencia de aminoácidos libres es utilizando el reactivo de ninhidrina, el cual reacciona con el grupo amino de los aminoácidos, pero no con polipéptidos. El reactivo de ninhidrina se torna púrpura o violeta en presencia de los grupos amino de los aminoácidos libres; sin embargo, en presencia de prolina se torna amarillo. La prolina reacciona diferente debido a que su grupo amino no está libre, sino que forma parte de un anillo en la molécula.

La unidad estructural básica de los carbohidratos es el monosacárido (o azúcar simple). Los monosacáridos se clasifican por el número de carbonos que contienen: por ejemplo, las triosas tienen tres carbonos, las pentosas cinco y las hexosas seis. Pueden contener tan pocos como tres o tantos como 10 carbonos.

Los monosacáridos se caracterizan por la presencia de un grupo aldehido terminal. Si grupos aldehido o cetónicos están involucrados en el enlace entre unidades de monosacáridos (como en la sacarosa), el disacárido no reaccionará con el reactivo de Benedict. Si sólo un grupo está involucrado en el enlace (como en la maltosa), el otro es libre de reaccionar con el reactivo. Los azúcares con grupos aldehido o cetónicos libres, sean monosacáridos o disacáridos, son llamados azúcares reductores (estos azúcares son oxidados, es decir pierden electrones, por el Cu2+ en el reactivo de Benedict).

Los monosacáridos pueden unirse para formar largas cadenas (polisacáridos) que pueden ser lineales o ramificadas. El almidón es un ejemplo de un polisacárido formado por completo de unidades de glucosa. El almidón no reacciona con el reactivo de Benedict debido a que el número de grupos aldehido libres (presentes sólo en el extremo de cada cadena) es pequeño en proporción con el resto de la molécula. Por lo tanto, se determinará la presencia de almidón con Lugol (ioduro de iodo/potasio, I2KI).

MATERIALES Y REACTIVOS.

 Por grupo:

25 mL de sudán IV ó Sudán III (preparado el 0.2% en etanol y acetona 1:1)

25 mL de reactivo de ninhidrina (preparado al 1% en acetona)

25 mL de solución 0.5% de histidina (u otro aminoácido)

25 mL de solución 0.5% de ácido aspártico (u otro aminoácido)

25 mL de solución 0.5% de aspartame

200 mL de Reactivo de Benedict

30 mL de Lugol

100 mL de jugo de papa

100 mL de jugo de cebolla

50 mL de aceite de cocina

50 mL de solución de agua jabonosa

300 mL de almidón al 1%

300 mL de glucosa al 1%

300 mL de maltosa al 1%

300 mL de sacarosa al 1%

 Por equipo:

19 tubos 13x100 con gradilla

1 pizeta de agua destilada

1 pedazo de papel filtro.

 Individual:

guantes quirúrgicos de látex.

METODOLOGÍA

Parte A. Determinación de lípidos.

1. Etiquete 4 tubos en secuencia del 1 al 4. Añada 1 mL de cada una de las sustancias listadas en la tabla 1 al tubo correspondiente. Añada tres gotas de sudan IV a cada tubo. Mezcle y añada 2 mL de agua a cada tubo. Si hay grasas o aceites presentes aparecerán como gotas rojas que flotan o como una capa roja flotadora. Registre en la tabla 1 las reacciones que ocurren en cada uno de los tubos.

Tabla 1.

Sustancias Reacción de solubilidad Sudan IV

1. Aceite comestible

2. Agua destilada

3. Solución de algún aminoácido

4. Solución jabonosa

Parte B. Determinación de aminoácidos.

1. Obtenga un pedazo de papel filtro y divídalo en cuatro cuadrante con lápiz. Marque los cuadrantes como A. B, C, y D.

2. Coloque una gota de cada solución señalada en la tabla 2 (etiquetadas A, B, C y D) sobre el papel filtro en el cuadrante que corresponda. Deje secar las gotas.

3. Aplique una gota de ninhidrina a cada mancha. Precaución; la ninhidrina es venenosa, evite el contacto con la

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