“DETERMINACIÓN DEL PESO MOLECULAR DE UNA PROTEÍNA USANDO CROMATOGRAFÍA POR EXCLUSIÓN MOLECULAR”.
Enviado por jaintoral • 25 de Febrero de 2016 • Ensayo • 1.531 Palabras (7 Páginas) • 1.071 Visitas
INSTITUTO POLITÉCNICO NACIONAL[pic 1][pic 2]
ESCUELA NACIONAL DE CIENCIAS BIOLÓGICAS
Laboratorio de Métodos de Análisis
“DETERMINACIÓN DEL PESO MOLECULAR DE UNA PROTEÍNA USANDO CROMATOGRAFÍA POR EXCLUSIÓN MOLECULAR”.
Alumno: Hernández Toral Leonardo Jain
Grupo: 4IM1
Sección 2
Profesor:
Luis Francisco Vázquez Flores
10 de diciembre del 2015
Según la definición dada por Keulemans la cromatografía es un método de separación en el que los componentes a desglosar se distribuyen entre dos fases, una de las cuales constituye un lecho estacionario de amplio desarrollo superficial y la otra es un fluido que pasa a través o a lo largo del lecho estacionario.1
La cromatografía de exclusión es un tipo de cromatografía líquida en la cual la fase estacionaria es sólida y la fase móvil es líquida. Se utiliza el término de “Cromatografía de exclusión por tamaño”. También se denomina “cromatografía de permeabilidad sobre gel” (GPC) o de permeación en gel. Su principal aplicación es la separación de las moléculas en función de su tamaño con la finalidad de estudiar el peso molecular y distribución de los polímeros).2
Objetivos
- Conocer el fundamento de la cromatografía por exclusión molecular.
- Encontrar el peso molecular de una proteína gracias a la cromatografía por exclusión molecular
- Mencionar los factores críticos que influyen en la separación por cromatografía por exclusión molecular.
Resultados
Tabla 1. Determinación de volumen vacío (V0).
Volumen de elución (mL) | A615 |
3 | 0 |
6 | 0 |
9 | 0 |
12 | 0 |
15 | 0,592 |
18 | 0,661 |
21 | 0,132 |
24 | 0,050 |
27 | 0,027 |
30 | 0,014 |
33 | 0,009 |
36 | 0,015 |
39 | 0 |
[pic 3]
El volumen en el cual se presenta la mayor absorbancia es nuestro volumen de vacío, el cual fue de 18 ml.
Tabla 2. Determinación del volumen de elución de las proteínas.
Volumen de elución | Absorbancia | ||||
Hemoglobina A405 | Peróxidasa A405 | Tripsina A280 | Lisozima A280 | Proteína problema A280 | |
3 | 0,041 | 0,002 | 0 | 0,302 | 0 |
6 | 0,033 | 0,009 | 0 | 0,221 | 0,023 |
9 | 0,029 | 0,007 | 0 | 0,266 | 0,040 |
12 | 0,023 | 0,002 | 0 | 0,141 | 0 |
15 | 0,451 | 0,001 | 0 | 0,113 | 0 |
18 | 1,513 | 0,011 | 0,002 | 0,224 | 0,383 |
21 | 1,455 | 0,570 | 0,075 | 0,505 | 0,596 |
24 | 1,157 | 0,979 | 0,156 | 0,875 | 0,802 |
27 | 0,771 | 0,501 | 0,174 | 0,832 | 0,795 |
30 | 0,424 | 0,157 | 0,142 | 0,687 | 0,635 |
33 | 0,222 | 0,157 | 0,104 | 0,423 | 0,610 |
36 | 0,100 | 0,046 | 0,105 | 0,256 | 0,574 |
39 | 0,084 | 0,020 | 0,099 | 0,153 | 0,490 |
42 | 0,065 | 0,009 | 0,083 | 0,142 | 0,500 |
45 | 0,063 | 0,015 | 0,039 | 0,062 | 0,439 |
48 | 0,061 | 0,008 | 0,013 | 0,096 | 0,221 |
51 | 0 | 0,005 | 0,002 | 0,048 | 0,058 |
54 | 0 | 0,014 | 0,006 | 0,082 | 0 |
57 | 0 | 0 | 0 | 0,061 | 0 |
60 | 0 | 0 | 0 | 0,078 | 0 |
63 | 0 | 0 | 0 | 0,096 | 0 |
66 | 0 | 0 | 0 | 0,044 | 0 |
69 | 0 | 0 | 0 | 0,080 | 0 |
72 | 0 | 0 | 0 | 0,064 | 0 |
75 | 0 | 0 | 0 | 0.043 | 0 |
78 | 0 | 0 | 0 | 0.091 | 0 |
...