Determinación del ácido úrico

DETERMINACIÓN DE ÁCIDO ÚRICO

• OBJETIVO

Calcular la concentración del ácido úrico en suero

• INTRODUCCIÓN

En el catabolismo de los ácidos nucleicos, las bases purínicas liberadas por hidrólisis de sus nucleótidos son parcialmente reutilizadas en el proceso de síntesis metabólica, pero sufren en parte un proceso de oxidación a ácido úrico pasando por la formación de xantina (2,6-dioxipurina). En la mayoría de los mamíferos el ácido úrico (sustancia muy poco hidrosoluble) prosigue su degradación catabólica dando lugar a la alantoína, compuesto de excelente solubilidad que es rápidamente excretado por vía renal. En el hombre y en los antropoides falta la enzima necesaria para este último paso catabólico, la uricasa, y en consecuencia se elimina el ácido úrico como producto final del metabolismo de las purinas. La solubilidad máxima del ácido úrico en plasma sería de unos 8.5 a 8.8 mg/dL, y a un pH de 7.4 aproximadamente el 98 por ciento del ácido úrico total se encuentra bajo su forma de sal monoalcalina. También se encuentra presente en los hematíes, y en condiciones de equilibrio su concentración eritrocitaria es aproximadamente la mitad de la plasmática. Debido a su muy mala solubilidad en los líquidos orgánicos, el ácido úrico es un catabolito potencialmente peligroso capaz de conducir a la constitución de formaciones cristalinas. El adulto medio tiene un contenido total aproximado de 1.2 g de ácido úrico en el cuerpo, lo cual puede considerarse una reserva miscible con un recambio alto. El ácido úrico de esta reserva procede de tres orígenes: 1) catabolismo de purinas endógenas, 2) catabolismo de purinas exógenas y 3) excreción renal/intestinal. La mayor parte de la formación de ácido úrico tiene lugar en el hígado, por su gran actividad de xantino oxidasa; el adulto medio excreta aproximadamente de 0.4 a 0.8 g de ácido úrico en orina cada 24 horas. Los valores de referencia varían con el método, edad, factores raciales, sexo, factores sociales y factores geográficos. Como un metabolito del metabolismo de las purinas, ácidos nucleicos y nucleoproteínas, los niveles anormales de ácido sérico pueden indicar un desorden en el metabolismo de estas sustancias. La metodología para la determinación de la concentración de ácido úrico se basa en la reacción de Trinder, un método enimático colorimétrico que involucra dos reacciones acopladas. En la primera, la enzima uricasa cataliza la oxidación del ácido úrico a alantoina, con la producción de peróxido de hidrógeno (H2O2):

Ácido Úrico + O2 + H2O                                       Alantoina + CO2 + H2O2[pic 1]

En la segunda reacción, la enzima peroxidasa cataliza la reacción del peróxido de hidrógeno con el 3,5- dicloro-2-hidroxibencilsulfonato (DHBS) y 4-amino antipirina (4-AAP) para formar un compuesto coloreado (Quinoneimina) que absorbe luz a 505 nm.

2H2O2 + DHBS + 4-AAP                             Quinoneimina + 4H2O[pic 2]

La cantidad de luz absorbida es directamente proporcional a la cantidad de colorante formado y, por lo tanto, a la concentración de ácido úrico en la muestra.

• FUNDAMENTO

El ácido úrico es oxidado por la enzima específica uricasa generándose alantoína y H2O2, el cual en unareacción mediada por la enzima peroxidasa (POD), reacciona con el ácido 3,5-Dicloro-2-Hidroxi-Bencensulfónico y 4-AAP produciéndose un compuesto coloreado con un máximo de absorción a 520nm., en cantidad proporcional a la cantidad de ácido úrico presente en la muestra.

a. Ácido úrico                                                        b.H2O2+ 4-AAP + 3,5 DCBS        [pic 3]

Complejo rosado

[pic 4]

        Uricasa (reacción de oxidación)                                                                                       Peroxidasa (reacción de oxidación)

Alantoína + H2O2

Alantoína.- Sustancia derivada de la oxidación del ácido úrico, que está presente en el alantoides, ellíquido amniótico y la orina fetal. Se utiliza para estimular la regeneración epitelial de heridas y úlceras.

• PROCEDIMIENTO

Mezclar e incubar por 5 minutos a 37ºC. Leer a 505 nm.

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