Determinación de los índices de fases e índices mitóticos parciales

MITOSIS

Introducción

El término mitosis se refiere a la división del núcleo en dos núcleos hijos, y se aplica el término citocinesis a la división del citoplasma para formar dos células hijas, cada una de las cuales contiene uno de los dos núcleos. La división nuclear y la división citoplasmática, aunque casi siempre bien sincronizadas y coordinadas, son procesos separados y netamente distintos. Toda división mitótica es un proceso en el que cada fase va seguida imperceptiblemente de la siguiente. Sin embargo, para fines descriptivos la mitosis se divide en cuatro fases: profase, metafase, anafase, telofase. Entre las divisiones mitóticas, existe una fase denominada interfase (Villee, 1996).

Materiales

Bisturí o cuchilla

Microscopios

Porta objetos – cubre objetos

Beakers pequeños

Estufa

Pinzas

Acido clorhídrico 1N

Orceina acética o lactoacética

Bulbos de cebolla

Vidrio de Reloj

Procedimiento

1. Cinco o seis días antes de comenzar los experimentos, escoja un bulbo de cebolla fresca y elimine mediante un raspado con una cuchilla, las raíces secas que se hallan en la base del bulbo. En un frasco boca ancha o un vaso desechable coloque la cebolla como aparece en la figura 1. Vierta agua en el frasco, hasta tocar la base de la cebolla. Mantenga la base de la cebolla húmeda y cambie el agua diariamente.

Figura 1. Montaje para obtención de raíces de cebolla

2. Coloque el recipiente en la semi-oscuridad a temperatura ambiente.

3. Mantenga la base de la cebolla húmeda, mediante la adición de agua si es necesario.

4. Cuando las raíces nuevas alcancen 1.5 a 2.0 cm. de longitud, cortarlas a 2 mm del ápice.

5. Colocar las raíces en una caja de petri, añadir HCl 1 N.

6. Llevar las a una estufa durante 10 minutos a 60 Cº.

7. Sacar los ápices a un vidrio de reloj y colocarlos en orceina acética o lactoacética, durante 20-25 minutos.

8. Colocar en un portaobjetos 3 ápices, deposite suavemente el cubreobjetos y realice el llamado “squash” (aplastamiento).

9. Observar y dibujar las diferentes fases.

Determinación de los índices de fases e índices mitóticos parciales

Este procedimiento se repetirá tres veces en la práctica aproximadamente cada hora. Las muestras procesadas serán observadas al microscopio con el objetivo de determinar el Índice de Fases (If) mediante el contaje de las diferentes fases del ciclo celular (Interfase, profase, metafase, anafase, telofase y citocinesis) en aproximadamente 150 células registradas y expresadas en porcentajes.

Finalmente la sumatoria de células en división (profase, metafase, anafase y telofase) respecto al total de

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