EL MICROSCOPIO Y SU UTILIDAD EN MICROBIOLOGIA. COLORACIONES BACTERIANAS
Enviado por pulan • 7 de Junio de 2014 • 3.600 Palabras (15 Páginas) • 1.401 Visitas
LABORATORIO DE MICROBIOLOGÍA AMBIENTAL
PRACTICA N° 3
TEMA EL MICROSCOPIO Y SU UTILIDAD EN MICROBIOLOGIA. COLORACIONES BACTERIANAS
Respossable Alicia Cañari Miranda
INTEGRANTES:
Roger Barboza Quispe
CICLO: III
TURNO: tarde
AULA: 413
Año 2014
EL MICROSCOPIO Y SU UTILIDAD EN MICROBIOLOGIA. COLORACIONES BACTERIANAS
El microscopio óptico es una herramienta básica para la investigación microbiológica de rutina ya que el examen microscópico de los microorganismos se realiza con microscopio óptico o microscopio electrónico
En Microbiología se han empleado varios tipos de microscopios ópticos: de campo claro, de contraste de fases y de fluorescencia. El de mayor uso es el microscopio de campo claro
OBJETIVOS
-Conocimiento, identificación y manejo del microscopio óptico y sus partes
-Preparación de muestras para su observación
FUNDAMENTO
-Conociendo que el protoplasma bacteriano tiene el mismo índice de refracción que el agua, es indispensable emplear procedimientos de tinción que permita visualizar las bacterias
-En esta práctica al empezar a tener contacto con las bacterias se hace necesario utilizar colorantes a fin de hacerlas más visibles y que permita estudiar su morfología, cuya información contribuye a la caracterización, identificación y diagnóstico de género bacteriano
PARTES DEL MICROSCOPIO OPTICO
I.-PARTE MECANICA
-Brazo: es de metal, en forma de C, por la parte superior, se une con el tubo óptico y por la parte inferior con el pie o base del microscopio
-Cabezal: contiene los sistemas de lentes oculares, puede ser monocular o binocular. Interiormente se encuentra el tubo óptico, en cuya parte superior se encuentra el ocular y en la parte inferior el revolver, donde se encuentran los objetivos
-Revolver: dispositivo giratorio, que posee dos, tres o mas roscas donde se atornillan los objetivos
-Platina: plataforma de forma cuadrada y que se utiliza para colocar la preparación a observarse
-Tornillos de enfoque: el macrométrico y micrométrico, que permiten el enfoque de la muestra con el objetivo de menor aumento
-Pie o base: tiene forma circular o de herradura y sirve de apoyo del microscopio
II.-PARTE OPTICA
-Oculares: cilindros cortos y huecos, que se colocan en la parte superior del tubo óptico. En la parte externa de estas lentes se indica el poder de amplificación: 4X, 10X, 15X
-Objetivos: tubos cortos atornillados al revolver. Sistema de lentes, cuyo poder de amplificación puede ser: 4X, 10X, 20X, 40X, 100X
-Condensador: se encuentra debajo de la platina y su función es concentrar los rayos luminosos sobre la preparación
-Diafragma: permite regular la intensidad de luz proyectada a la apertura de la platina
-Luz: fuente de luz
MANEJO DEL MICROSCOPIO
Las siguientes recomendaciones se deberán tomar en cuenta para el uso correcto del microscopio
1.-Levante completamente el condensador
2.-Abra el diafragma completamente
3.-Haga girar el revolver de los objetivos y enfoque el objetivo de menor aumento
4.-Coloque la lámina portaobjetos sobre la platina y asegúrela
5.-Mirando lateralmente, mueva el espejo hasta que la lámina portaobjetos sea iluminada, cierre el diafragma
6.-baje el objetivo hasta más o menos medio centímetro de la altura de la lámina y empiece a subir lentamente hasta que focalice el frotis con el ocular
7.-Ajuste el espejo hasta que tenga usted una iluminación extensa y uniforme. Centre la fuente luminosa
8.-Ajuste la altura del condensador para la posición que le de la luz más fuerte y uniforme
9.-Abriendo parcialmente el diafragma, tendrá la luz adecuada para su observación
10.-Para usar el objetivo seco de mayor aumento, haga girar el revolver después de haber enfocado con el de pequeño aumento
11.-Para usar el objetivo de inmersión siga las instrucciones siguientes:
Enfoque un campo apropiado con el objetivo de menor aumento
Levante el condensador y abra el diafragma
Coloque una gota de aceite de inmersión sobre el frotis
Cambie por el objetivo de inmersión procediendo con mucho cuidado y termine de enfocar usando el tornillo micrométrico
12.-Cuando termine de observar, limpie el lente de inmersión con papel lente, el objetivo de menor aumento deberá estar en posición cuando el microscopio se va a guardar
13.-Si el microscopio a usarse posee iluminación directo, se obviaran los pasos 5 y 7
DETERMINACION DEL AUMENTO DE OBSERVACION
Se consigue multiplicando el aumento del ocular por el aumento del lente objetivo en posición de observación y el producto es el aumento total
Ejemplo:
Ocular : 10X
Objetivo: 10X
Aumento: 100X
COLORACIONES MICROBIANAS
La morfología de las bacterias se puede examinar de 2 maneras:
-Observando los microrganismos vivos en suspensión
-Observando las células muertas en frotis seco y teñidas con diferentes procedimientos de coloración
OBJETIVOS
-Diferenciar a los microrganismos por su capacidad tintoreal
-Relacionar la diferencia en composición de pared celular de acuerdo a la coloración de Gram
FUNDAMENTO
Debido a la naturaleza química de la célula bacteriana, su afinidad por los colorantes básicos es manifiesta, si tomamos en cuenta su principal contenido de ácidos nucleicos
Los colorantes de mayor aplicación son los derivados del alquitrán de hulla (anilinas): Cristal violeta, violeta de genciana, fucsina básica, safranina, azul de metileno y verde de malaquita y van a actuar mejor mediante la adición de mordientes, porque aumentan la permeabilidad de la pared celular y membrana citoplasmática
Para una buena tinción hay que tomar en cuenta:
-La naturaleza de la bacteria
-Edad del cultivo muestra y
-Una buena aplicación de la técnica
COLORACION POR EL METODO DE GRAM
Es uno de los principales métodos de amplia utilidad para clasificar a las bacterias en 2 grandes grupos: Gram (+) y Gram (-). Las primeras toman el violeta de genciana tiñéndose de azul violáceo y las segundas pierden el violeta de genciana al ser lavadas con el diferenciador alcohol acetona; es necesario imprimirle un colorante de contraste: fucsina o safranina, para ser observadas tiñéndose
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