EVALUACIÓN DE LA PRODUCCIÓN DE CELULASAS

Parámetros a evaluar:

 Tipo de sustrato

Posibles: bagazo de caña y mezcla de bagazo de caña y salvado de trigo/ cascarilla de arroz u otro deshecho agroindustrial.

Se realizara una caracterización bromatológica de los sustratos.

Técnicas:

 Cenizas totales (A.O.A.C., 1923).

 Determinación de proteína total: Método Kjendahl (A.O.A.C., 1979,1981, 1982).

 Determinación de la humedad: método por secado (A.O.A.C., 1984)

 Determinacion del extracto etéreo: Metodo soxhlet (A.O.A.C., 1945, 1950,1951,1970).

 PH inicial

Ya que el PH no es un parámetro que se pueda controlar más que al inicio y para aumentar la digestibilidad del sustrato se dará un tratamiento alcalino al bagazo de caña.

Técnica:

 Se utiliza una solución de NaOH al 5%, con una proporción solido: liquido de 1:10, y se incuba a 60°C durante 1hora a 96rpm. Posteriormente el bagazo es lavado hasta llegar a la neutralización y secado en horno a 80°C durante 12hrs.

 Usarun buffer de citrato de sodio

 Temperatura

La temperatura de cultivo es un factor muy importante, temperaturas muy altas pueden desnaturalizar enzimas, por el contrario temperaturas muy bajas afectan el rendimiento.

Técnica:

 Se encontró en investigaciones pasadas que este tipo de hongos tienen una mayor producción en un intervalo de temperaturas de 30 a 40°C; entre estas se realizaran variación para determinar cuál es la temperatura más adecuada.

 Tamaño del inoculo

Técnica:

 De las esporas obtenidas se realizan diluciones a fin de cubrir absorbancias que van de 0.1 a 0.9. previamente se realiza un barrido espectrofotométrico de cada una de las suspensiones de esporas, para encontrar la longitud de onda del espectro visible ( 380 a 700 nm) en la que se obtiene el valor mas alto de absorbancia, posteriormente de las mismas diluciones se realizan un conteo de esporas al microscopio en cámara de neubauer. Con los datos obtenidos se procede a la construcción de curvas estándar que relacionan el numero de esporas/ ml de solución contra la absorbancia.

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