Elaboración de bloque de parafina para cortes histológicos vegetales y animales y observación macroscópica y microscópica

Elaboración de bloque de parafina para cortes histológicos vegetales y animales  y observación macroscópica y microscópica

Autor: Katherine Massiel Rojas Mariños

Resumen

El objetivo de la práctica fue elaborar bloques de parafina incrustados con muestras vegetal y animal para su posterior observación microscópica y macroscópica, para lo cual se empleó cera que fue fundida y vertida en contenedores de papel formando una base para las muestras vegetal y animal respectivamente y luego fue cubierto totalmente por la cera. Después de la solidificación se hicieron cortes finos y se observaron en microscopio. En el corte histológico vegetal se observó epidermis y parénquima y en el corte histológico animal fibras musculares.

Introducción

En cualquier estudio de histología se trata de obtener a través del microscopio datos de organismos o partes de los mismos normales o alterados  para analizarlos y reconstruir modelos conceptuales  que permitan explicar cómo están hechos los organismos y así poder responder a las diferentes preguntas que sobre ellos se hace cualquier observador (De juan, 1999), para lo cual se emplean diferentes técnicas de acuerdo a lo que se quiera obtener .

Una de estas técnicas es la inclusión o incrustación el cual consiste en sumergir la pieza a estudiar en un medio líquido (medio de inclusión) que tras penetrar  en el tejido y sus células, se solidifica adquiriendo una dureza y consistencia homogénea para que la pieza pueda ser cortada. De esta forma se obtiene un bloque formado por el medio de la inclusión y la pieza incrustada en su interior, ambos solidificados (De juan, 1999).

En general, los medios de inclusión no son miscibles con el agua por lo que para poder infiltrar la pieza y penetrar hasta el interior de sus células y otros elementos tisulares, se debe realizar otras fases.

El procedimiento de inclusión consta de cuatro fases claramente definidas: deshidratación el cual se puede realizar con  alcohol etílico, alcohol isopropílico, propanol, acetona, etc., diafanización o aclaramiento , el cual consiste en dar un aspecto traslucido o transparente a la pieza y se logra sustituyendo el liquido deshidratante por otro liquido intermedio entre los cuales merecen destacarse los siguientes benzol, xilol, toluol, cloroformo, aceite de cedro, esencia de clavo y óxido de propileno. Estos productos deben usarse poco tiempo pues hacen quebradiza a la pieza,  e infiltración y realización de bloques que consiste en la penetración del medio de inclusión en el interior de los tejidos y las células de la pieza estudiada, disolviéndose en el agente diafanizador hasta sustituirlo, entre ellos tenemos parafina, paraplast, celodina, gelatina, plásticos y resinas (De juan, 1999).

La parafina es una sustancia que a temperatura ambiente es un sólido con aspecto de cera de color blanco, inodoro e insípido. Es insoluble en agua, pero soluble éter, benceno, xileno y tolueno, así como algunos ésteres. La parafina no se afecta por los reactivos químicos más comunes, pero se quema con facilidad. Es el medio de inclusión más utilizado en los laboratorios de histología y de anatomía patológica (Molist y col., 2011).

El objetivo de la práctica fue elaborar bloques de parafina incrustados con muestras vegetal y animal para su posterior observación microscópica y macroscópica en el caso de los bloques.

Material y método

Para la elaboración de los bloques se utilizó cera, la cual se fundió en una olla hasta que este liquida. Para la inclusión con muestras vegetal y animal se utilizo hojas y carne de pollo de los cuales se tomó una pequeña parte y se los coloco en alcohol para su deshidratación, luego en pequeños moldes de papel se procedió a colocar una base de parafina  y sobre el   la muestra vegetal o animal respectivamente procurando que queden en el centro del contenedor, se cubrió totalmente la parte restante con parafina y se dejó enfriar al ambiente por un tiempo de 30 minutos. Luego se procedió a cortar con navaja  laminas finas del bloque de parafina las cuales fueron observadas en el microscopio tanto de la muestra animal como vegetal.

Resultados

El bloque de parafina dio un soporte solido que permitió el corte del tejido en delgadas capas. (fig. 2)

Se observó en el microscopio los cortes vegetal y animal, en el vegetal se observó la epidermis y el parénquima de la hoja (fig. 3), en el corte con la muestra animal se observó fibras musculares. (fig. 4)

Discusión

La técnica de inclusión en parafina es  un baño  de la misma en los tejidos para crear un medio homogéneo, que permite la realización de los cortes de menor grosos con gran facilidad y una precisión mayor que cuando los mismos se realizan por congelación (EUITA). Como toda técnica presenta ventajas e inconvenientes, sobre todo en la modalidad de inclusión,  donde se pueden discutir ciertos procesos que son válidos en histología animal pero que al aplicarlos a los tejidos vegetales pueden originar alteraciones a veces profundas, en las estructuras anatómicas e histológicas. El primer problema que  se encuentra al incluir en parafina un tejido es la apolaridad de la misma; para poder incluir el tejido  se han descrito varios métodos de deshidratación ya que permite la eliminación completa del agua de los tejidos (Chacín y col.)  , pero en general se sigue , como en histología animal , la deshidratación or alcohol etílico en graduaciones crecientes hasta llegar a alcohol absoluto.

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