Espermatogenesis

PRACTICA No. 1

Obtención de espermatozoides de epidídimo (cabeza, cuerpo y cola) de toro.

Introducción. Los espermatozoides de una gran variedad de especies, cobayo, rata, conejo, hámster, carnero, toro, cerdo sufre el proceso de maduración durante su paso a través del epidídimo dando como resultado el desarrollo de su capacidad fertilizante al momento de alcanzar la parte más distal del órgano. El epidídimo contribuye activamente a la maduración del espermatozoide con factores producidos por el epitelio bajo la influencia de andrógenos. Cuando se ha analizado la movilidad de los espermatozoides de diferentes segmentos del epidídimo se ha encontrado un incremento en la movilidad progresiva a medida que los espermatozoides pasan por el epidídimo, además, de un incremento en la formación de puentes disulfuro.

Objetivo. Aprender a obtener espermatozoides de las diferentes regiones del epidídimo de toro y observar su tipo de movilidad.

Material:

1 Jeringa de insulina

1 Jeringa de 10 ml.

Portaobjetos

Cubreobjetos

3 vasos de precipitado de 100 ml.

Tubos de ensaye

Gradilla para tubos

2 embudos

Micropipeta de 100 ul.

Gasas

Guantes

Material Biológico:

Epidídimos de toros adultos recién sacrificados.

Equipo:

Estuche de disección

Microscopio óptico

Baño María

Soluciones:

Medio de Tyrode (TALP) - (NaCl 114 mM, KCl 3.2 mM, CaCl2 2.0 mM, MgCl2 0.5 mM, NaCO3 25.0 mM, NaH2PO4.H2O 0.4 mM, Glucosa 5.0 mM, Lactato de sodio 10.0 mM, Piruvato de sodio 0.1 mM, Penicilina 100,000 Unidades/L, Estreptomicina 100,000 Unidades/L, Rojo de Fenol 10 mg/L, Albúmina de suero bovino 3 mg/mL). Ajustar el pH a 7.4.

NaCl 0.9%

Metodología:

Los epidídimos de toro se obtienen del rastro de animales adultos recién sacrificados.

Se trasladan al laboratorio en solución salina al 0.9% a 37 °C.

Se limpian de grasa y sangre (perfundir con solución salina por las diferentes venas con jeringa de insulina).

Espermatozoides de la cola del epidídimo.

Los espermatozoides de la cola del epidídimo se obtienen por perfusión al inyectar con una jeringa de 10 ml de la solución de TALP a 37°C por el conducto deferente. Se realiza una pequeña incisión en la cauda (cola del epidídimo) y por ella se colectan los espermatozoides en un vaso de precipitado. Se realiza una preparación y se observan en el microscopio óptico.

Espermatozoides de cuerpo y cabeza del epidídimo.

Se separa la cabeza y el cuerpo del epidídimo, se colocan en vasos de 100 ml por separado con solución de TALP a 37°C. Se corta el tejido en pequeños trozos y se agita levemente en la solución de TALP. La suspensión obtenida

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