Esterilización de materiales de laboratorio de microbiologia

a. CALOR SECO

 Calor seco directo

Esteriliza por medio de la incineración de los microorganismos mediante el flameado a la llama del mechero, se puede realizar con una asa de Kolle o utilizando un incinerador que alcanza temperaturas entre 600°C - 900°C.

 Calor seco indirecto

Esteriliza por medio de aire caliente, utilizando hornos a temperaturas entre 160 y 180º C durante 180 a 240 minutos. Se destruyen los microorganismos por deshidratación de las células. Por este medio se pueden esterilizar todos los materiales de vidrio del laboratorio (placas Petri, pipetas, matraces erlenmeyer, tubos de ensayo, etc.

b. CALOR HÚMEDO

 Vapor de agua a presión

La temperatura de ebullición del agua sometida a presión, es mayor que lo normal. Esto se logra utilizando el autoclave, en donde la temperatura alcanza 121ºC a 15 libras de presión (una atmósfera). Si esta temperatura se mantiene por 15 minutos a una hora, se garantiza la esterilización de todo material que se halle dentro. Esteriliza por coagulación de las proteínas microbianas por acción de alta temperatura (que penetra fácilmente por la humedad). Se utiliza este método para esterilizar medios de cultivo, soluciones diversas, además de todo material contaminado antes de ser desechado.

 Vapor Fluente o Tindalización

Se utiliza vapor de agua a 100ºC. Algunas sustancias no pueden someterse a temperaturas mayores de 100ºC porque sufren alteración. Este método llamado también "esterilización fraccionada" consiste en calentar el material o sustancia a 100ºC por 2 horas, por tres o cuatro días consecutivos, dejando intermedios de 24 horas para que las esporas resistentes de los microorganismos germinen y se puedan destruir en forma de células vegetativas cuando se sometan al calentamiento posterior. Se puede utilizar el autoclave sin presión, solo dejando circular el vapor.

 Agua hirviendo

Este método no asegura la esterilización porque algunas esporas resisten altas temperaturas durante varias horas. Sin embargo es una buena práctica de desinfección para materiales, utensilios u objetos.

 Pasteurización

Destruye algunos microorganismos sobre todo los patógenos (termolábiles), por ejemplo el Mycobacterium tuberculosis muere cuando es sometido a 60 ºC por 15 minutos.
Para la fabricación de quesos se sub-pasteuriza la leche entre 64°C a 70ºC por 15 a 20 segundos. Para la pasteurización de leche fluida, jugos de frutas y otros productos, se puede utilizar diversos métodos de pasteurización:

• Pasteurización larga: entre 64°C  y  70ºC  durante  30 minutos.
• Pasteurización corta: a 72ºC durante 15 segundos.
• Pasteurización alta: a temperatura de 80°C  a  90°C  durante  1 a 3 seg.

Para pasteurizar crema de leche se utiliza un método corto que puede ser:

• 5 seg. a  95.6ºC
• 15 a 16 seg. a 85ºC.

En todos los casos enseguida del calentamiento se procede a enfriar bruscamente

Se utiliza para eliminar microorganismos de sustancias termolábiles.

a. BUJÍAS FILTRANTES

Elimina los microorganismos por retención en el filtro, por diferencia entre sus cargas eléctricas.

• Filtros Chamberland: son bujías huecas de porcelana porosa, sin vidriar.
• Filtros Berkefeld: son cilindros huecos de tierra de diatomeas.

b. FILTROS DE MEMBRANA

Las membranas están constituidas por acetato de celulosa, retienen los microorganismos por acción mecánica de colador. Los microorganismos no pasan por los poros que son más pequeños. Para retener bacterias se utilizan membranas de 0,45 µm de tamaño de poro. Para retener virus se utilizan membranas de 0.01 µm de poro.

Es la emisión y propagación de energía en el espacio o a través de un medio material. Las radiaciones se diferencian por su longitud de onda (lambda–símbolo griego λ ) la que se mide en medidas de longitud del Sistema de Unidades Internacionales.

Las radiaciones se clasifican por su efecto biológico:

• Radiaciones ionizantes (de alta energía).
• Radiaciones no ionizantes (de baja energía).

a. RADIACIONES IONIZANTES

Son radiaciones electromagnéticas producidas por la emanación de fotones con alta energía, suficiente para desplazar electrones de las moléculas en las que incide y transformarlas en iones. Tienen gran poder de penetración y acción letal sobre los microorganismos.
Se aplican en el campo de la genética, medicina, técnica industrial y para destruir microorganismos en productos comerciales, principalmente farmacéuticos en: materiales dentales, materiales médicos desechables (jeringas plásticas, catéteres, materiales de cirugía, entre otros).

Se clasifican en:

• Radiaciones corpusculares (Radiaciones Alfa, Beta, Rayos cósmicos).

• Rayos catódicos (Beta), son microbicidas. Esta radiación penetra envolturas a medio ambiente, se utiliza para esterilización de material quirúrgico, medicamentos y otros productos.

• Radiaciones electromagnéticas (Rayos X, Rayos Gamma).

• Rayos X, tienen gran energía y gran poder de penetración. Son letales para microorganismos y para formas de vida superior. No se aplica en usos industriales por ser muy costoso, Puede producir mutantes microbianos.

• Rayos Gamma, tienen alta energía y gran poder de penetración. Se origina por desintegración de isótopos radiactivos, el más usado en medicina es el Cobalto 60.

b. RADIACIONES NO IONIZANTES

Son radiaciones electromagnéticas de menor frecuencia y menor efecto biológico. Actúan sobre los elementos por efecto térmico, mecánico, fotoquímico.

Se clasifican en:

• Radiaciones ópticas: Luz ultravioleta (UV), Infrarroja, luz visible.

• Luz Ultravioleta, es una radiación germicida que, por efecto fotoquímico destruye proteínas y ácidos nucleicos produciendo la muerte celular.
  Se utiliza en inspección del aceite de oliva, si este es refinado, al incidir sobre la superficie producirá una fluorescencia verde azulada, si el aceite no fuera refinado la fluorescencia será anaranjada.
  
  Por acción catalítica produce:

• Sobre el agua, formación de peróxido de hidrógeno (agua oxigenada) que destruye gérmenes.
• En el aire, sobre la molécula de oxígeno (O2) forma ozono (O3) que tiene acción germicida.
• Puede esterilizar la superficie de objetos en contacto directo, pero tiene muy poca capacidad de penetración en la materia.
• La luz solar tiene rayos UV pero su acción germicida es poco intensa.
• Se utiliza para mantener desinfectadas áreas de trabajo microbiológico, salas quirúrgicas, áreas estériles, entre otros.

• Radiaciones electromagnéticas: Microondas, radiofrecuencias.

• Microondas, son radiaciones no germicidas, solo elimina microorganismos por el calentamiento, pero este es irregular (no calienta en forma homogénea).

La desinfección química se realiza aplicando sustancias químicas que actúan en procesos de óxido-reducción, desnaturalizando proteínas, hidrolizando y destruyendo paredes y membranas celulares. Las sustancias pueden ser bacteriostáticas o bactericidas.

Se produce aplicando sustancias químicas gaseosas, letales para los microorganismos.

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