Examen de Fundamentos de Microbiología

                     Examen de Fundamentos de Microbiología         FECHA:

Recuperación primer parcial

NOMBRE:

A usted se le proporcionó una cepa de Salmonella sp. y se le pide corroborar su identificación por pruebas bioquímicas ya que se sospecha que puede ser Salmonella typhimurium.

Con base a lo anterior desarrolle lo siguiente:

1.- ¿Cuál sería su morfología microscópica por tinción de Gram?

Negativo (coloración rosa). La Salmonella typhimurium posee una pared celular delgada de péptidoglicano y una membrana celular externa, característica de las Gram negativas (estructura didérmica).

Al realizar la tinción de Gram se inicia con un colorante primario: cristal violeta, que tiene afinidad por el péptidoglicano de la pared bacteriana; posteriormente se agrega el lugol, que sirve como mordente e impide la salida del cristal violeta formando un complejo cristal violeta-lugol, el cual satura los espacios del péptidoglicano de la pared celular. Las Gram negativas, al poseer menor cantidad de péptidoglicano, no pueden retener este complejo.

Después se aplica la mezcla alcohol-acetona que deshidrata la pared bacteriana y en las bacterias Gram negativas, destruye la membrana externa (debido a que es soluble a la acción de solventes orgánicos como la mezcla alcohol-acetona).  Por último, se coloca safranina, que actúa como colorante secundario y tiñe a las bacterias que no retienen el complejo cristal violeta-lugol.

2.- ¿Cuáles son las pruebas bioquímicas que utilizaría para su identificación?

Una manera de diferenciar S. typhimurium de otras especies de Salmonella es por medio de la prueba TSI, ya que esta bacteria no puede fermentar lactosa y sacarosa; así como también por su fermentación de azúcares sin producción de gas (dado que es una bacteria anaerogénica).

3.- De acuerdo a las pruebas seleccionadas describa el fundamento de cada una de ellas:

La prueba de TSI (o agar hierro-triple azúcar) se usa para diferenciar enterobacterias y se basa en la capacidad de fermentar glucosa, lactosa y sacarosa. El medio cuenta con extracto de carne y pluripeptona, las cuales aportan los nutrientes adecuados para el desarrollo bacteriano.

La lactosa, sacarosa y lactosa son los hidratos de carbono fermentables, los cuales producen ácidos que se detectan por medio del indicador rojo de fenol, el cual vira al color amarillo en medio ácido. Mientras tanto, el tiosulfato de sodio se reduce a sulfato de hidrógeno que reacciona con una sal de hierro, produciendo sulfuro de hierro de color negro.

4.- ¿Qué cepa utilizaría como control de calidad o referencia para su marcha de aislamiento e identificación?

La Typhimurium ATCC 14028 como cepa de referencia. Salmonella enterica subespecie I, serovar Typhimurium LT2 de la cual se tiene la secuencia completa de su genoma.

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