Examen directo de sangre periferica (frotis)

EXAMEN DIRECTO DE SANGRE PERIFERICA (FROTIS)

FROTIS

El frotis es el extendido de una gota de sangre en una lámina portaobjetos seguida de la fijación de la muestra y posterior tinción con Giemsa

Procedimiento

Obtener la muestra de acuerdo con lo descrito en el ítem 3.1.

a) Colocar una gota de sangre en el extremo de la superficie de una lámina portaobjetos limpia.

b) Acercar a la muestra el borde de otra lámina portaobjetos, posesionándola de tal manera que formen un ángulo de 45º y dejar que la muestra se distribuya en el borde de la lámina.

c) Conservando el ángulo de 45º, deslizar la lámina auxiliar sobre la superficie de la lámina con la muestra. El extendido de sangre o frotis debe ser una película fina.

d) Dejar secar a temperatura ambiente

e) Fijar la muestra con metanol absoluto P.A durante un minuto

f) Colorear con Giemsa.

LECTURA DE LA GOTA GRUESA Y FROTIS

Enfocar con el objetivo de 10X, luego, colocar una gotita de aceite de inmersión sobre la muestra y examinar con el objetivo de inmersión 100X.

Examinar toda la lámina en el microscopio.

Resultado

Informar la presencia o ausencia de formas trypomastigotes deTrypanosoma cruzi.

GOTA GRUESA

La gota gruesa consiste en concentrar y defibrinar la gota de sangre de la muestra, la que posteriormente será deshemoglobinizada y teñida con Giemsa durante 30 minutos.

Procedimiento

Obtener la muestra de acuerdo con lo indicado en 4.1

a) Colocar una gota de sangre sobre la superficie limpia de una lámina portaobjetos.

b) Empleando la esquina de otra lámina, realizamos movimientos circulares, desde el centro de la gota, de modo que la sangre se distribuya uniformemente (en un área de 1cm2 ).

c) Dejar secar a temperatura ambiente.

d) Colorear con Giemsa.

Coloración Giemsa

4.2.2.1. Materiales

• Solución Giemsa stock

• Solución amortiguadora

• Probeta 10 mL.

• Varilla de coloración.

Procedimiento

a) Colocar las láminas sobre la varilla de coloración.

b) Preparar el volumen necesario de solución Giemsa diluida, aproximadamente 2 mL por lámina.

• En la probeta colocar 0,1 mL (2 gotas) de solución Giemsa stock por cada mL de solución amortiguadora.

• Homogeneizar la solución colorante.

c) Cubrir la muestra con la solución Giemsa diluida, (figura 14).

d) Dejar actuar el colorante durante 30 minutos.

e) Lavar con agua corriente y dejar secar a temperatura ambiente.

XENODIAGNOSTICO

Es una técnica que permite la multiplicación del parásito in vivo y consiste en hacer picar a la persona sospechosa de infección por el vector libre de infección, de preferencia la especie de triatomino de mayor importancia en la región. Es aplicable tanto en la forma clínica aguda como en la crónica portador.

Equipos

Microscopio con objetivo de 20X de aumento.

Material biológico

Ninfas de III o IV estadio de triatominos que proceden de criaderos en laboratorio.

Materiales

- Cajas de madera o plástico apropiadas

- Tul.

- Bandas elásticas.

- Sujetadores de tela.

- Pollos para alimentación de triatominos.

- Pinzas punta fina.

- Láminas portaobjetos.

- Laminillas cubreobjetos

Procedimiento

a) Colocar en cada caja de cinco a diez ninfas de triatominos del III y IV estadio, los que deben estar en ayuno por lo menos 15 días.

b) Cubrir la caja con tul, asegurándolo con una banda elástica.

c) Rotular la caja con el número de muestra, nombre y fecha de aplicación.

d) Sujetar la caja sobre el brazo del sospechoso de infección mediante una venda de tela, permitiendo que los triatominos se alimenten por 20 minutos o hasta observar que las ninfas hayan aumentado su volumen por la sangre ingerida

e) Conservar la caja con los triatominos a temperatura del laboratorio 25º-30 ºC y 70% de humedad relativa.

f) Alimentarlos cada 15 días, sujetando las cajas con las ninfas sobre la piel desnuda de un ave (pollo, paloma u otro).

g) A los 30 días, examinar en el microscopio una muestra de heces de los triatominos. Obtener la muestra sobre una lámina portaobjetos por presión del abdomen del insecto con una pinza.

h) Cubrir la muestra con una laminilla para examinarla en el microscopio. Se puede realizar el examen individual de cada triatomino o una alícuota del pool de las muestras fecales.

i) De ser negativo, examinar otra alícuota del contenido digestivo del triatomino a los 60 días. Se aconseja la aplicación de por lo menos cuatro xenodiagnósticos para alcanzar su mayor sensibilidad en los casos de infección crónica o portador.

Lectura

Examinar la muestra en el microscopio (objetivo de 20X de aumento), buscando formas móviles: epimastigotes o trypomastigotes metacíclicas del parásito que son identificadas

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