Extracción de ADN genómico

IDENTIFICACIÓN DE UN TRANSGÉN EN RATONES

Actividad 1: Extracción de ADN genómico

El objetivo de esta práctica es observar si un ratón es transgénico o no. Para ello vamos a partir de un trozo de tejido de la cola del ratón al se le han añadido 0.5 ml lysis buffer, preparado con proteinasa K (100 µl de proteinasa K por cada 8 ml de lysis buffer), agitamos e incubamos la muestra en un baño a 55ºC o/n. Volvemos a agitar y añadimos 250 µl NaCl 5M. Dejamos reposar 10 min en hielo y centrifugamos durante 10 minutos. Finalmente pasamos 50 µl de nuestra muestra a un eppendorf limpio.

A continuación vamos a añadir 250µl de H2o al eppendorf con una pipeta y después 1/10 vol de NaCl 5M (ó Acetato sódico 3M) + 3 vol de ETOH 100%. Después agitamos el eppendorf con la muestra hasta que se obseve el ovillo de ADN.

Cogemos el ovillo de ADN y lo hacemos pasar por 0,5 ml de ETOH y agitamos. Tiramos el ETOH y secamos el ovillo a temperatura ambiente. Preparamos el gel de agarosa y colocamos las muestras en los pocillos con una pipeta. Al día siguiente añadimos al gel bromuro de etidio, lavamos el gel con agua destilada y colocamos la muestra bajo la luz ultravioleta para observar el resultado de la electroforesis.

Observamos que hay unas regiones que emiten luz ultravioleta, que significa que esos genes son transgénicos, mientras que las regiones que no emiten luz son genes no transgénicos, es decir, ratones silvestres.

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