Fundamento Y Aplicaciones De La técnica PCR.

La Reacción en Cadena de la Polimerasa (PCR) se considera una de las técnicas más sensibles y específicas de pruebas moleculares. Se desarrolló en 1986 por el Dr. Kary Mullis, en Estados Unidos; se fundamentó en la necesidad de obtener gran número de copias de fragmentos específicos de ADN de manera rápida y económica.

Esta técnica se basa en una replicación in vitro de una molécula de ADN genómico (ADNg) o ADN complementario (ADNc), mediante ciclos repetitivos que constan de tres temperaturas. En cada uno de los ciclos las moléculas se duplican hasta que los reactivos se agotan. La longitud del producto amplificado la delimitan los primers u oligonucleótidos (iniciadores) que deben ser específicos.

La amplificación in vitro de la PCR se apega a las mismas reglas de replicación. Se basa en una secuencia que sirve de molde y por complementariedad sintetiza la cadena antiparalela. Para que se lleve a cabo se requiere una cadena de ADNg o ADNc que sirva de molde, una enzima ADN polimerasa y cofactores necesarios para la actividad de esta, desoxinucleótidos (dNTP) para la síntesis y oligonucleótidos o primers.

Esquema de la PCR

1. Inicio de la desnaturalización

2. Ciclos de amplificación

1. Temperatura de desnaturalización

2. Temperatura de alineamiento

3. Temperatura de extensión

4. Amplificación final

5. Almacenamiento temporal

Modalidades de la PCR: PCR convencional, PCR cualitativa, PCR semicuantitativa, PCR cuantitativa, PCR múltiple (varias regiones o genes), PCR selectiva (detecta genes silvestres o mutados), PCR in situ, PCR anidada (nested – PCR), PCR en tiempo real, entre otros.

Aplicaciones:

Los productos de PCR puede utilizarse para la secuenciación, detección de patógenos infecciosos (virus, bacterias, hongos), amplificación de segmentos para su análisis mediante ADN finger – printing, o huella de ADN, en medicina forense, detección de mutaciones, análisis de expresión génica o determinación de carga viral, entre otras.

Bibliografía

Salazar, A, Sandoval A, Armendáriz, J. (2013). Biología molecular, fundamentos y aplicación en las ciencias de la salud. Mc. Graw Hill. México, Df.

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