Aplicaciones Pcr

Aplicaciones de la PCR:

La PCR ha sustituido en gran medida la amplificación de fragmentos por clonación en

células y tiene numerosísimas aplicaciones. Fundamental para la secuenciación del xenoma humano y de los demás xenomas secuenciados incluso el momento. De gran interés para el Laboratorio de Diagnóstico Clínico es la secuenciación de microorganismos, para lo cual existen preparados comerciales en forma de sondeas para detectar agentes infecciosos. Otro campo de interés está en la detección de enfermedades genéticas, así como en la determinación de la compatibilidade genética de dos individuos a cara descubierta la un transplante. Por último, cabe destacar su grande utilidad en medicina forense y antropoloxía.

La tecnología de la PCR está siendo aplicada en numerosos campos de investigación:

gracias a esta técnica se pueden detectar enfermedades víricas, o tomar unas cuantas

células fetales de la sangre de una mujer embarazada y realizar un análisis genético. La

técnica está siendo ampliamente utilizada en medicina forense para aumentar pequeñas

muestras, por ejemplo, de la saliva en el reverso de un sello de correos, y construir

huellas de ADN que permitan esclarecer delitos. Los historiadores pueden emplear la

técnica para estudiar la evolución, o las enfermedades de épocas pasadas, utilizando

fragmentos de ADN de momias u otros restos. Los inspectores de sanidad pueden tomar

muestras de hamburguesas, por ejemplo, y descubrir con qué carne fueron hechas, o

averiguar a partir de una gota de vino la variedad exacta de uva de la que procede.

Aplicaciones en antropoloxía molecular (Secuenciación de ADNs fósiles):

El uso del PCR ha abierto la posibilidad

de aislar secuencias de ADN a partir de unas pocas copias intactas presentes en especimenes de museo y descubrimientos arqueológicos.

Las técnicas de amplificación resultan de utilidad por la posibilidad de encontrar secuencias de genes reales de especies extintas, pudiendo observarse sus secuencias nucleotídicas y realizar comparaciones con las actuales. Para eso, se necesita que el fósil posea un pequeño número de células que aún contengan unos pocos nanogramos de DNA. Habitualmente, el DNA está roto en fragmentos muy pequeños (100 a 200 pares de bases), pero se se encuentran algunas moléculas un poco más largas que sirven como molde para amplificar secuencias de genes completos.

En este terreno, es muy importante trabajar en condiciones muy estrictas para evitar la contaminación de DNA fósil con el DNA actual, ya que le serviría de molde, pudiendo llevarnos a la confusión.

Identificación de especies y Control de cruzas entre animales:

Las técnicas para identificar especies pueden ser muy importantes para descubrir fraudes comerciales, tales como vender carne de una especie mas barata a los precios de otra mas cara, o el comercio ilegal de especies en peligro. Estos estudios pueden realizarse utilizando el ADN mitocondrial, el cual presenta secuencias altamente variables entre especies distintas, auque sean cercanas entre sí, y bastante conservadas dentro de la misma especie.

Los controles de relaciones Familiares entre animales tiene importancia forense para el control de comercio ilegal de especies protegidas. Individuos jóvenes de especies en peligro son sacados de sus lugares de nacimiento y disfrazados por certificados veterinarios falsos. En estos casos el estudio familiar es el único medio de descubrir el origen ilegal de los individuos.

Proyecto Genoma Humano:

El proyecto genoma humano es un proyecto Internacional cuyo objetivo final es obtener una descripción completa del genoma humano a través de la secuenciación del ADN. El genoma que se investiga es el genoma nuclear. Desde su inicio el proyecto ha sido justificado especialmente por los beneficios médicos que se espera obtener del conocimiento de la estructura de cada gen humano. Esta información proporciona una capacidad de diagnóstico en individuos con riesgo de ser portadores del gen de alguna enfermedad además de proporcionar un marco de trabajo para el desarrollo de nuevas terapias, además de nuevas estrategias para la terapia génica.

Diagnóstico de parasitoses:

Existen kits comerciales para PCR de muchos parasitos, como por ejemplo, para Entamoeba histolytica, Plasmodium spp, Toxoplasma gondii, Babesia (muy semejante morfolojicamente a Plasmodium y ambos intraeritrocitarios), etc. Tras la realización de la PCR, el diagnóstico se lleva a cabo mediante electroforesis, por comparación con patrones positivos.

Ejemplo: la detección de Plasmodium se hace con una variante de la PCR que es la Nested PCR, que se realiza en dos zancadas: en una 1ª PCR, 1 microlitro de DNA extraido amplifícase usando primers específicos. Con 1 microlitro de este producto obtenido se realiza una 2ª PCR, amplificándolo de nuevo utilizando primers específicos de especie. Se separan 10 micrólitos de este producto, teñido con bromuro de etidio (colorante fluorescente) por electroforesis en gel de agarosa al 2% durante 15 minutos y se visualiza con luz UV. Se compara con un patrón en que aparecen separadas bandas de distinto nº de pares de bases.

La banda de 800 pb es diagnóstica de P. ovale, la de 205 pb de P. falciparum, la de 144 pb de P. malariae y la de 120 pb de P. Vivax.

Diagnóstico médico por PCR

La PCR ha permitido el desarrollo de nuevas estrategias diagnósticas en numerosos

campos de la medicina:

-Detección de microorganismos:

En bacteriología clínica, la PCR puede usarse para la detección de genes responsables de resistencias antimicrobianas, de genes que codifican para factores de virulencia y para la tipificación de aislados bacterianos. La PCR también permite la detección de agentes infecciosos como los virus de la hepatitis B y C, Virus Zoster, Epstein Barr, Citomegalovirus, el papiloma y el sida. También pueden detectarse otros microorganismos patógenos (por lo que también es de especial valia en investigaciones epidemmiológicas) como las clamidias, las micobacterias que causan tuberculosis, los Heliobacter causantes de gastritis y los tripanosomas responsables de la

enfermedad de Chagas.

La manera clásica de diagnosticar enfermedades infecciosas causadas por virus,

consiste en detectar los anticuerpos que el paciente produce contra el virus. Si hay

anticuerpos circulantes se sabe que hay o hubo infección, pero no se puede distinguir

entre las dos posibilidades. En cambio, la detección directa del genoma del patógeno

mediante PCR permite saber con certeza

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