Hidrolisis De Sacarosa Y Reconocimiento De Polisacaridos

INTRODUCCION

Los carbohidratos son compuestos que contienen cantidades grandes de grupos hidroxilo. Los carbohidratos más simples contienen una molécula de aldehído o una cetona. Todos los carbohidratos pueden clasificarse como monosacárido, disacáridos o polisacáridos. Los polisacáridos son los mas grandes y contienen cientos y cientos de unidades de monosacáridos. La presencia de los grupos hidroxilo permite a los carbohidratos interactuar con medio acuoso y participar en la formación de uniones de hidrogeno, tanto dentro de sus cadenas como entre cadenas de polisacáridos. Pueden contener nitrógeno, fosfato y azufre.1

MATERIALES Y METODOS

- 2 Pipetas graduadas de 1 y 2 ml.

- 5 tubos de ensayo por grupo.

- 1 pinza para tubos de ensayo.

- 1 Beaker de 50 o 100 ml.

- 1 Gradilla para los tubos de ensayo.

- 1 mortero

- 1 vidrio de reloj

- 4 placas de calentamiento o baños de agua hirviendo para el experimento.

- Soluciones de sacarosa 1% p/v.

- Almidón 1% p/v.

- Reactivos de Fehling A y B.

- Solución de Seliwanoff.

- Reactivo de Lugol.

- HCl 10% v/v y NaOH 10% p/v.

-HCl concentrado, [HCl].

-Acido tricloroacético (TCA) 10%.

1. HIDRÓLISIS DE LA SACAROSA

• En tres tubos de ensayo se adiciono:

- Tubo 1: 2 ml de sacarosa 1% p/v más 1 ml (20 gotas) de agua.

- Tubo 2: 2 ml de sacarosa 1% p/v más 1 ml (20 gotas) de HCl 10% v/v.

- Tubo 3: 2 ml de sacarosa 1% p/v más 1 ml (20 gotas) de NaOH 10% p/v.

- Tubo 4: Igual al Tubo 2, pero se deja reposar y se agrega 1 ml de NaOH 10% p/v

• Caliente los tubos hasta ebullición por un tiempo de 5-8 minutos. Posteriormente, realice para cada tubo la Prueba de Fehling con una alícuota del volumen.

• Para el tubo o los tubos que den respuesta positiva al ensayo de Fehling, se le realiza el ensayo de Seliwanoff con la alícuota no utilizada.

-ENSAYO DE LUGOL PARA POLISACARIDOS

1. En tres tubos de ensayo adiciones las muestras. Tubo1: 1 ml de solución de almidón 1% p/v;

tubo 2: 1 ml de jugo de papa; y Tubo 3: 1 ml de jugo de cebolla, y agregue en cada tubo 0.2 ml

de Lugol. Anote el color de la solución.

2. La solución anterior se coloca en un baño de maría y se anote el cambio; posteriormente,

observe lo que sucede a temperatura ambiente.

- HIDRÓLISIS DEL ALMIDÓN

1. En un tubo de ensayo coloque 2 ml de solución de almidón 1% p/v con 1 ml de [HCl]

concentrado. Se calienta hasta ebullición durante 10 minutos.

Enfriar el tubo de ensayo hasta temperatura ambiente y agregue 1 ml de [NaOH].

Agregue en un tubo de ensayo 1 ml de la solución anterior para el ensayo de Lugol.

Para el ensayo de Fehling tome 1 ml de la solución de almidón tratada.

2. En un tubo de ensayo coloque 2 ml de saliva más 1 ml de almidón 1% p/v (temperatura

ambiente); a los 5 minutos tome una alícuota (1 ml) y realice la prueba de Fehling y/o

de Benedict.

- AISLAMIENTO DEL GLUCÓGENO

• Se maceran 2 g de hígado fresco y frió en un mortero preenfriado con 2 ml de TCA 10% (Ácido

tricloroacético) y 0.25 g de arena lavada y limpia, hasta homogenización.

• Coloque el homogenizado en tubo y centrifugue 5 min (minutos) a 3000 rpm; se elimina el

sedimentado.

• Por cada volumen del sobrenadante agregue lentamente 2 volúmenes de etanol 95% v/v,

mezcle suavemente y deje en hasta que observe un sedimento en suspensión.

• Si no se observa que el sedimentado flocula, añada un poco de NaCl, caliente en baño de

María (3 a 5 min) hasta observar un sedimentado.

• Centrifugue por 5 min a 3000 rpm.

• Se descarta el sobrenadante y el sedimentado es el glucógeno.

• Disuelva el sedimentado en 0.5 ml de agua, posteriormente agregue 1 ml de etanol 95%,

centrifugue por 5 min a 3000 rpm; descarte el sobrenadante.

• Se lava el sedimentado con la minima cantidad de etanol 95%.

• El sedimentado anterior se coloca en un vidrio de reloj y se pesa el glucógeno.

• Disuelva 8 mg de glucógeno en 1 ml de agua.

• Identifique la presencia de glucógeno por el ensayo de Lugol.

RESULTADOS

Hidrolisis de la sacarosa

Para la prueba de fehling: al momento que se le realizó la prueba para cada uno de los tubos, resultó positiva el tubo 1 y 4, mientras que los tubos 2 y 3 resultó prueba negativa.

Para la prueba de seliwanoff: al hacer esta prueba con las alícuotas restantes de los tubos, solo presentó cambios de color el tubo 1 y 4, se calentaron y el tubo 4 no cambió de color, mientras que el 1 cambió de amarillo claro a naranja claro.

Ensayo de lugol para polisacáridos

Al momento que se realizó la primera parte de la prueba resultó que para el tubo 1 cambio de color a verde oscuro lo cual indicó prueba positiva, en el tubo 2 el color resultante de la solución fue amarillo verdoso lo cual es positiva y para el tubo 3 resultó negativa, ya que el color de la solución fue purpura. En la segunda parte cuando se calentaron los tubos, resulto que el tubo 1 cambio de color a café pálido y presento precipitación espesa, el tubo 2 cambió a amarillo y resultó con un precipitado el cual se fue hacia

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