Inoculación y aislamiento de microorganismos en diferentes muestras ambientales

[pic 1] 

UNIVERSIDAD REGIONAL AMAZÓNICA IKIAM  

CARRERA DE BIOTECNOLOGÍA  

PRÁCTICA NO. 1

TEMA: Inoculación y aislamiento de microorganismos en diferentes muestras ambientales 

1. DATOS GENERALES:

        NOMBRES:                            

           Cartagena Stefani; Parra Rossana; Rivera Michelle; Villacres Bryan; Vinueza Damaris.

SEMESTRE: 7mo

        FECHA DE REALIZACIÓN:                            FECHA DE ENTREGA:

                   09/05/2022                                                            17/05/2022 

1. OBJETIVOS:  

        2.1.         GENERAL 

• Realizar la inoculación en medios de cultivo y aislamiento de una muestra de tierra contaminada con derivados de petróleo.  

        2.2.         ESPECÍFICOS 

• Desarrollar técnicas de aislamiento e inoculación en muestras ambientales.
• Realizar diluciones seriadas de la muestra ambiental (tierra contaminada con derivados de petróleo)  
• Preparar correctamente el material de laboratorio para los medios de cultivo y el aislamiento de la muestra ambiental.

1. PROCEDIMIENTO  

      Para preparar el medio y agua peptonada se prepararon 350 ml de agar nutritivo y 350 ml de SABURO. Luego se lo colocó en la autoclave por 25 min a 121°C para su esterilización; donde se dispensa en placas Petri adecuadas; Se preparó un volumen de 200 ml para la preparación de agua peptonada.

     Remoción de microorganismos de muestras ambientales (suelo contaminado con derivados de petróleo): Se pesó 1 g de masa de suelo y se diluyó en 9 ml de agua peptonada estéril (10-1), luego se homogeneizó y se reservó por un tiempo para obtener sólidos que se puedan decantar.

     Mediante esta solución se realizaron dos diluciones adicionales (10-2 y 10-3) en agua peptonada estéril, luego se tomó 1 ml de cada dilución para inoculación y se colocó en agar nutritivo con asas Drygalsky, al final de la caja Petri se incubaron a temperatura ambiente durante 4-7 días y se evaluó su crecimiento utilizando una sola caja de Petri dividida en 3 partes y marcadas con diluciones (10-1, 10-2 y 10-3).

1. EQUIPOS Y MATERIALES:

1. Equipos

• Autoclave
• Balanza analítica
• Cámara de flujo laminar

1. Materiales

1. Reactivos  

• Agua destilada  
• Agar Nutritivo  
• Medio Sabouraud  
• Agua peptona estéril  

1. Utensilios de laboratorio

• Micropipeta
• Pipeta de goteo  
• Vidrio reloj
• Cajas Petri  
• Espátula  
• Pipetas de 10ml  

1. Muestra Ambiental ● Suelo contaminado con petróleo

1. MARCO TEÓRICO:

     Los microorganismos son claves en los ecosistemas, ya que son una estrategia ecológica importante para el desarrollo de prácticas integradas como el control de nutrientes, enfermedades y plagas (Bhattacharyya et al., 2016); Desempeñan un papel importante en los sistemas, como los microorganismos promotores del crecimiento (Trabelsi et al., 2013), ayudando a acelerar el crecimiento de los cultivos y prevenir enfermedades (Paramanandham et al., 2017).  

     Se ha demostrado que los microorganismos necesitan una fuente de carbono obtenido a partir de hidrocarburos de petróleo. Sin embargo, los derrames de petróleo son una de las fuentes de contaminación tanto del suelo como del agua, este tipo de eventos ambientales tienen un impacto directo en poblaciones de microorganismos.  

     Por ejemplo, la resistencia microbiana por la presencia de crudo en el suelo, crea selectividad y reduce la diversidad. Pero hay microorganismos (Bacteria- hongos) resistentes a este entorno estresante, que desarrollan  y utilizan respuestas enzimáticas específicas para desenvolverse ese tipo de entorno (Atlas et al., 1991).  

     Los medios de cultivo (nutrientes) en forma de preparados sólidos, semisólidos o líquidos crean un modelo microbiano en el laboratorio, intentando reflejar su entorno natural, en lo que se refiere a la satisfacción de las necesidades básicas y las más importantes como organismo vivo (Nápoles,

Martínez, Somers, Costales, & Gómez, 2006). En este caso, el diseño del medio de crecimiento será consistente con los requerimientos del microorganismo y el propósito por el cual se multiplicará.  

     Por lo tanto, en esta práctica se realiza un proceso de aislamiento de microorganismos para crear un medio de cultivo y conocer los tipos de organismos, la asociación o interacción   que hay en las muestras de residuos de petróleo,  

6.         DISCUSIÓN DE LOS RESULTADOS OBTENIDOS

      El suelo contaminado con hidrocarburos reprime el intercambio gaseoso, desencadenando una serie de procesos físico químicos simultáneos provocando toxicidad y dificultando su tratamiento por sus altos gradientes de salinidad, destruyendo la estructura terciaria de las proteínas, desnaturalizando enzimas y deshidratando células, afectando a muchos microorganismos usados para el tratamiento de remediación de suelos contaminados (López et al., 2006).

     Al proporcionar a un medio de cultivo las condiciones apropiadas se produce la proliferación de microorganismos los cuales crecen en su superficie. (Geo et al. 2015) Generalmente para la preparación de un medio de cultivo se toma en consideración: los nutrientes como por ejemplo las peptonas que son utilizadas como aditivos de nutrientes, la atmósfera, la temperatura y el tiempo de incubación, con lo cual se determinan el crecimiento de las bacterias. Siendo los medios de cultivo estériles que no contienen ningún organismo vivo excepto el que se está cultivando, por lo cual permiten el crecimiento de la mayoría de los microorganismos presentes en las muestras. (Lagier et al. 2015)

...