Instructivo cepas

1. Objetivos y alcance

 Describir los procedimientos a realizar para garantizar el buen manejo de las cepas de referencia en el Laboratorio de control de calidad San José

1. Alcance: Aplica a todas las cepas de referencia que se manejan en el Laboratorio de calidad San José.  
2.  Responsabilidades Es responsabilidad del Jefe técnico la aplicación y supervisión de las actividades descritas  en este instructivo.

1. Definiciones

 Cultivo de referencia: cultivos provenientes de una colección de cultivos reconocida nacional y/o internacionalmente.

 Cepas de reserva: Las cepas de reserva son una serie de alícuotas de cultivos idénticos         obtenidas en el laboratorio por subcultivo de la cepa de referencia.

  Cepas de trabajo: son los subcultivos de los microorganismos obtenidos de las cepas de reserva en el laboratorio.

4. Actividades

4.1. El jefe del laboratorio es la persona encargada directamente de las cepas de referencia que ingresan al laboratorio. 4.2. El Jefe del laboratorio mantiene un inventario actualizado de las cepas de referencia  mediante el registro MPC-LMAZ-I01-F01 Listado de cepas de referencia. 4.3. Las cepas de referencia deben ser almacenadas entre 0-5 ºC según la recomendación de cada cepa hasta su posterior uso.  4.4. Las cepas de reserva que son  muestras idénticas a las cepas de referencia siendo las de reserva un subcultivo de la anterior, estas cepas están bajo el uso y la responsabilidad del Jefe del Laboratorio. El Jefe del Laboratorio o la persona designada por el Jefe del Laboratorio, son los responsables de la activación de las cepas de referencia de acuerdo con las instrucciones del fabricante. Usualmente se transfieren en cajas de Agar Cuenta Estándar, se siembra por la técnica de estría para el aislamiento de colonias. Incubar a 35ºC durante 24 hrs. 4.5. Seleccionar una colonia aislada y verificar su pureza mediante tinción al Gram y observación al microscopio

4.6. Una vez confirmada su pureza preparar los cultivos de reserva en tubos con caldo de enriquecimiento o un caldo no selectivo e incubar a 35 ºC por 24 hrs. Adicionar Glicerol estéril al caldo para obtener una concentración de 10% de glicerol en el caldo.  Separar en porciones de 1 mL a 2 mL en tubos criogénicos estériles y almacenar en congelación a una temperatura de   -70 ºC a -80 ºC. 4.7. En caso de descongelamiento de las cepas no se deben volver a congelar. El número de         repiques a partir de la cepa de referencia no deben ser tomados en cuenta por el    laboratorio, el número de pases realizados forman parte de los antecedentes de la cepa y quedaran registrados en el formato MPC-LMAZ-I01-F02: Listado de cepas de reserva y de trabajo.                  4.8. Las cepas de trabajo son subcultivos de las cepas de reserva, y estas son para el uso general en el laboratorio. Se preparan  a partir de una cepa de reserva, repitiendo las actividades descritas en 4.4 y 4.5. Una vez confirmada la pureza, se transfiere una colonia aislada en un tubo con Agar Soya Tripticasa o Agar Cuenta Estándar. Incubar por 24 h a  35 ºC y almacenar en refrigeración. Transferir bimestralmente repitiendo los pasos descritos en este punto, anotando el número de transferencias de cada cultivo de trabajo. El número de repiques a partir de la cepa de trabajo no deben ser tenidos en cuenta por el laboratorio, el número de pases realizados forman parte de los antecedentes de la cepa y quedaran registrados en el formato MPC-LMAZ-I01-F02: Listado de cepas de reserva y de trabajo.  4.9. Semestralmente se verifica la viabilidad y pureza de las cepas de referencia del laboratorio. Las verificaciones incluyen pero no se limitan a:  Tinción de Gram  Crecimiento en medios selectivos y diferenciales  Pruebas bioquímica

...