LABORATORIO No.8 DIGESTIÓN DEL ADN CON ENDONUCLEASAS DE RESTRICCIÓN

LABORATORIO No.8

DIGESTIÓN DEL ADN CON ENDONUCLEASAS DE RESTRICCIÓN

Laboratorio de Biología Molecular y Celular II

Iliann Ortega (8-971-2029), Karol Ramos (8-959-1001), Winston Reyes (8-956-244), Laura Rodríguez (8-957-97) y Roberto Saénz (8-966-1138)

En consideración del profesor Luis Jaén

Universidad de Panamá

Facultad de Medicina

Grupo 2.4 B Medicina

Martes 29 de octubre de 2019

Introducción

Las enzimas de restricción se encuentran en bacterias (y otros procariontes). Reconocen secuencias específicas de ADN, llamadas sitios de restricción, y se unen a ellas. Cada enzima de restricción reconoce solo uno o unos pocos sitios de restricción. Cuando encuentra su secuencia blanco, la enzima de restricción cortará las dos cadenas de una molécula de ADN. (Academy, 2017) Por lo general, el corte es en o cerca del sitio de restricción y ocurre en un patrón ordenado y predecible. Son nucleasas que cortan ADN de doble cadena cuando reconocen un patrón de secuencia específico. Generan fragmentos de ADN conocidos como fragmentos de restricción. Estas presentan actividad endonucleasa, son de origen bacteriano y cortan los enlaces fosfodiéster del ADN en una secuencia específica denominada secuencia diana. (Biomodel, 2013) Las enzimas de restricción son herramientas imprescindibles en biología molecular, ingeniería genética y biotecnología.  El uso de estas enzimas como herramienta biotecnológica surgió de la necesidad de cortar las largas cadenas de ADN genómico para manipularse y analizarse en fragmentos más pequeños. (BioTed, 2015) El empleo de las enzimas de restricción y otras enzimas que modifican ácidos nucleicos, como la ligasa, permitió desarrollar la metodología del ADN recombinante. La importancia de las enzimas de restricción radica en su gran especificidad para reconocer una secuencia corta de DNA bicatenario e hidrolizar un enlace fosfodiéster en cada hebra, siempre en la misma posición. Los fragmentos de DNA resultantes son útiles para iniciar la clonación celular o acelular, para el análisis del DNA, para elaborar mapas físicos de restricción o para la detección de polimorfismos. (Cuevas & Topete, 2016)[pic 1]

Objetivos Generales

1. Conocer y realizar la técnica de digestión del ADN utilizando dos enzimas de restricción.

Objetivos específicos

1. Digerir el ADN del bacteriófago Lambda con enzimas de restricción.

2. Separar por electroforesis los fragmentos de restricción.

3. Analizar los fragmentos de restricción del bacteriófago Lamba.

4. Realizar mapas de restricción.

Metodología

Resultados

Discusión

Preguntas

Conclusiones

Referencias

Academy, K. (2017). Enzimas de restrcción. Recuperado el 27 de Octubre de 2019, de https://es.khanacademy.org/science/biology/biotech-dna-technology/dna-cloning-tutorial/a/restriction-enzymes-dna-ligase

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